ELISA（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）是一種常見的免疫學(xué)檢測技術(shù)，可用于檢測血清、唾液、尿液等生物樣本中的蛋白質(zhì)、抗體等分子。該技術(shù)基于特異性抗原與抗體的結(jié)合反應(yīng)，利用酶標(biāo)記的二抗或底物進(jìn)行檢測。ELISA有直接ELISA、間接ELISA、競爭ELISA等不同類型，具有高靈敏度、特異性和可重復(fù)性，廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)、生命科學(xué)、環(huán)境監(jiān)測等領(lǐng)域。
那ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果不如預(yù)期是什么原因呢
（1）低信號/陰性結(jié)果：
? 樣品處理問題：可能存在樣品稀釋不當(dāng)、保存不當(dāng)、存在干擾物質(zhì)等。
? 抗體質(zhì)量問題：使用的抗體可能與目標(biāo)物質(zhì)結(jié)合不充分或不特異。
? 實(shí)驗(yàn)操作問題：可能存在洗滌不徹底、孵育時(shí)間過短等實(shí)驗(yàn)操作不準(zhǔn)確的問題。
（2）高背景/假陽性結(jié)果：
? 阻斷問題：阻斷步驟不充分，導(dǎo)致非特異性結(jié)合。
? 抗體交叉反應(yīng)：使用的抗體可能與其他非目標(biāo)物質(zhì)發(fā)生交叉反應(yīng)。
? 樣品污染：存在非特異性的樣品污染，如細(xì)胞碎片、大量蛋白質(zhì)等。
（3）結(jié)果變異性：
? 實(shí)驗(yàn)條件問題：實(shí)驗(yàn)條件（如溫度、濕度、孵育時(shí)間）的不一致性可能導(dǎo)致結(jié)果的變異性。
? 實(shí)驗(yàn)重復(fù)性問題：可能存在實(shí)驗(yàn)操作的差異或者試劑批次的差異，影響結(jié)果的一致性。
（4）非線性結(jié)果：
? 標(biāo)準(zhǔn)曲線問題：標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備可能存在誤差，導(dǎo)致濃度計(jì)算不準(zhǔn)確。
? 高濃度樣品稀釋問題：如果使用高濃度的樣品進(jìn)行稀釋，稀釋比例選擇不當(dāng)可能導(dǎo)致非線性結(jié)果。
