293來(lái)源病毒包裝細(xì)胞；ΦA(chǔ)操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ?，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。
3）病毒包裝準(zhǔn)備：待細(xì)胞生長(zhǎng)至適宜密度（通常約為70%-80%匯合），進(jìn)行病毒包裝前的預(yù)處理。移除細(xì)胞瓶中的培養(yǎng)基，用PBS輕柔洗滌細(xì)胞兩次，以去除殘留的培養(yǎng)基成分和死細(xì)胞。根據(jù)所使用的病毒包裝系統(tǒng)（如慢病毒、腺相關(guān)病毒等），配制好相應(yīng)的包裝質(zhì)粒和輔助質(zhì)粒混合物，以及轉(zhuǎn)染試劑。確保所有操作均在無(wú)菌條件下進(jìn)行，避免污染。
4）病毒轉(zhuǎn)染：將包裝質(zhì)?；旌衔锱c轉(zhuǎn)染試劑按預(yù)定比例混合，輕輕顛倒混勻后，室溫靜置一段時(shí)間（如15-20分鐘），以形成轉(zhuǎn)染復(fù)合物。隨后，將此復(fù)合物逐滴加入到細(xì)胞瓶中，輕輕搖晃細(xì)胞瓶以確保均勻分布。將細(xì)胞瓶放回37℃溫箱，繼續(xù)培養(yǎng)。
5）病毒收集與純化：轉(zhuǎn)染后48-72小時(shí)，根據(jù)細(xì)胞狀態(tài)和病毒產(chǎn)生情況，收集細(xì)胞上清液。利用超速離心、病毒純化柱或親和層析等方法，對(duì)病毒顆粒進(jìn)行純化，以提高病毒滴度和去除雜質(zhì)。純化后的病毒可儲(chǔ)存于-80℃冰箱，供后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。在整個(gè)操作過(guò)程中，需嚴(yán)格遵循生物安全規(guī)范，防止病毒泄露和交叉感染。
