人NADH-細(xì)胞色素b5還原酶ELISA試劑盒雙抗體夾心法(檢測(cè)未知抗原)

人NADH-細(xì)胞色素b5還原酶ELISA試劑盒雙抗體夾心法(檢測(cè)未知抗原) 

1、用緩沖液將抗體稀釋至1-10ug/ml。在反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次。



2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗滌(同時(shí)做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽性對(duì)照孔)。



3、加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.05ml。37℃ 孵育0.5～1小時(shí)，洗滌。



4、加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。



5、終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml



6、結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽性。




若實(shí)驗(yàn)結(jié)果呈現(xiàn)陽性，則需進(jìn)一步確認(rèn)其特異性及準(zhǔn)確性。此時(shí)，可嘗試采用其他檢測(cè)方法如Western blot或質(zhì)譜分析進(jìn)行交叉驗(yàn)證，以排除假陽性結(jié)果的可能性。同時(shí)，回顧實(shí)驗(yàn)過程，確保每一步操作均嚴(yán)格按照說明書執(zhí)行，避免操作失誤導(dǎo)致的誤差。

此外，對(duì)于呈陰性的樣本，也不可掉以輕心。特別是在疾病早期或患者免疫力較低的情況下，抗原濃度可能過低，導(dǎo)致無法被試劑盒有效檢測(cè)。因此，對(duì)于疑似病例，建議結(jié)合臨床癥狀、病史及多種檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行綜合判斷。

在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，及時(shí)整理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，記錄實(shí)驗(yàn)過程中的關(guān)鍵步驟及觀察結(jié)果。對(duì)于異?；虿环项A(yù)期的結(jié)果，進(jìn)行深入分析，找出可能的原因，并調(diào)整實(shí)驗(yàn)方案或條件，以提高后續(xù)實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和可靠性。

總之，人NADH-細(xì)胞色素b5還原酶ELISA試劑盒雙抗體夾心法作為一種靈敏、特異的檢測(cè)手段，在生物醫(yī)學(xué)研究中發(fā)揮著重要作用。然而，其結(jié)果的解讀需結(jié)合多方面因素，以確保準(zhǔn)確性和可靠性。