人類胚胎干細(xì)胞H1（干細(xì)胞庫保藏）形態(tài)冷凍保存細(xì)胞之方法：

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細(xì)胞凍存步驟：

資源名稱　人類胚胎干細(xì)胞H1（干細(xì)胞庫保藏）形態(tài)
種屬:H1

類型:人胚胎內(nèi)細(xì)胞團(tuán)

形態(tài):球形*

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:hES完全培養(yǎng)液（600ml）： DMEM/F12 (Invitrogen, 11330) 466 ml Knockout Serum Replacement(Invitrogen, 10828) 120 ml Non-essential Amino Acids, 100X (Invitrogen, 11140) 6 ml Glutamax (Invitrogen 35050) 6 ml 55mM 2-mercaptoethanol (Invitrogen, 21985) 1.5 ml bFGF (Invitrogen, 13256) 2.4 μg 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度。
細(xì)胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復(fù)蘇手法對于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲存的zui好方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種：產(chǎn)品僅用于科研
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞培養(yǎng)過程：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
以下是人類胚胎干細(xì)胞H1（干細(xì)胞庫保藏）形態(tài)的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
異煙-d4質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口Isoniazid-d4  Ratacetylcholinereceptoraibody,AChRabELISA試劑盒大鼠乙酰膽堿受體抗體(AChRab)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  (H2O2)測試盒 可見分光光度法 50管/48樣

噻托溴銨-d3質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口Tiotr-d3 Bromide  小鼠Toll樣受體9(TLR-9/CD289)ELISA試劑盒 ，英文名： TLR-9/CD289 ELISA Kit  RatMothersagainstdecapeaplegichomolog7,Smad7ELISA試劑盒大鼠Smad7ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

去乙基鹽酸胺酮-d4質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口Desethyl Amiodarone-d4   大鼠纖溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)ELISA檢測試劑盒Ratplasminogenactivatorinhibitor1,PAI-1ELISAKit 96T/48T  HumanHepatitisCvirusIgG,HCV-IgGELISA試劑盒人型肝炎IgG(HCV-IgG)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

去乙基鹽酸胺酮質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口Desethyl Amiodarone   人HIV-1 TAT互動蛋白2(HTATIP2/TIP30)試劑盒 Human HTATIP2 ELISA Kit  HumanL-phenylalanine,LPAELISAKit人苯氨酸(LPA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
RatInsulieceptorβ,ISR-βELISA試劑盒大鼠受體β(ISR-β)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  71386-38-4麻楓樹酚酮B品牌  Jatropholone B

小鼠再生胰島衍生蛋白3α(REG3α)ELISA試劑盒 ，英文名： REG3α ELISA Kit  130430-97-6辛辣內(nèi)酯A規(guī)格  Pungiolide A

猴超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)ELISA檢測試劑盒MonkeyhighsensitivityC-ReactiveProtein,hs-CRPELISAKit 96T/48T  124961-61-1多被銀蓮花皂苷R8   Raddeanoside R8

犬抗毒(RV)抗體試劑盒 Dog rabies virus(RV)aibody ELISA Kit  26575-93-923-乙酰澤瀉醇C說明書  23-Acetyl alisol C

英文名稱ThromboxaneB2人素(TXB2)規(guī)格：96T/48T  74805-90-6甲基麥冬高黃酮A品牌  methylophiopogononeA
20316-62-5銀椴苷規(guī)格  Tiliroside   英文名稱RatOsteocalcinELISAKit大鼠骨橋素(Osteocalcin)規(guī)格：96T/48T

20316-62-5密蒙花苷   Tiliroside  英文名稱RatOsteocalcinELISAKit大鼠骨橋素(Osteocalcin)規(guī)格：96T/48T

20315-25-7原B1說明書  Proanthocyanidin B1   英文名稱RatOsteocalcin(OT)ELISAKit大鼠骨鈣素(OT)ELISAKit規(guī)格：96T/48T

20315-25-7原B1品牌  Procyanidin B1  英文名稱RatOsteocalcin(OT)ELISAKit大鼠骨鈣素(OT)ELISAKit規(guī)格：96T/48T

20283-92-5迷迭香酸規(guī)格  Rosmarinic acid  英文名稱RatoponinIELISAKit大鼠心肌肌鈣蛋白I(cTnI)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
人類胚胎干細(xì)胞H1（干細(xì)胞庫保藏）形態(tài)小鼠轉(zhuǎn)化生長因子β3(TGFβ3)ELISA試劑盒 ，英文名： TGFβ3 ELISA Kit  3877-86-9葫蘆素D規(guī)格  CucurbitacinD

犬雌激素(E)ELISA檢測試劑盒Canineesogen,EELISAKit 96T/48T  18444-66-1葫蘆素E   Cucurbitacin E

犬維生素E(VE)試劑盒 Canine Vitamin E,VE ELISA Kit  58546-34-2葫蘆素IIA說明書  Cucurbitacin IIA 

英文名稱HumanansformingGrowthfactorαELISAKIT人轉(zhuǎn)化生長因子α(TGFα)規(guī)格：96T/48T  60976-49-0老鸛草素品牌  Geraniin

超氧化物歧化酶(SOD)活性檢測試劑盒50  522-12-3槲皮苷規(guī)格  Quercitrin
收到人類胚胎干細(xì)胞H1（干細(xì)胞庫保藏）形態(tài)處理方法
產(chǎn)品僅用于科研1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時再進(jìn)行傳代操作。