小鼠誘導(dǎo)型多能干細(xì)胞（iPS細(xì)胞）OSKM-1（干細(xì)胞庫保藏）說明書冷凍保存細(xì)胞之方法：

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細(xì)胞凍存步驟：

資源名稱　小鼠誘導(dǎo)型多能干細(xì)胞（iPS細(xì)胞）OSKM-1（干細(xì)胞庫保藏）說明書
種屬:OSKM-1

類型:小鼠胚胎成纖維細(xì)胞

形態(tài):球形*

模式菌株:未知

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:小鼠iPS完全培養(yǎng)液（600ml）： DMEM (Invitrogen 12430) 485 ml ES級(jí)FBS (biochrom S4115) 90 ml Glutamax (Invitrogen 35050) 6 ml NEAA (Invitrogen 11140) 6 ml Nucleosides (Millipore ES-008-D) 6 ml LIF (Millipore ESG1107) 60 μl（終濃度為1000U/ml） β-Mer (Invitrogen 21985) 1.5 ml PS (Millipore TMS-AB2-C) 6 ml 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度。
細(xì)胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對(duì)于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對(duì)細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲(chǔ)存的zui好方式，快遞時(shí)間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種：產(chǎn)品僅用于科研
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對(duì)細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞培養(yǎng)過程：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號(hào)16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
以下是小鼠誘導(dǎo)型多能干細(xì)胞（iPS細(xì)胞）OSKM-1（干細(xì)胞庫保藏）說明書的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
銦標(biāo)準(zhǔn)溶液（1000μg/ml,基體：1.0 mol/L 硝酸）Indium standard質(zhì)量規(guī)格：1000μg/ml,基體：1.0 mol/L 硝酸  小鼠血小板衍生生長因子AB(PDGF-AB)ELISA試劑盒 ，英文名： PDGF-AB ELISA Kit  ELISAKitTGFβ2小鼠轉(zhuǎn)化生長因子β2規(guī)格：48T/96T

銦標(biāo)準(zhǔn)溶液（100mg/L(20℃)，基體：1％HCl）Indium standard質(zhì)量規(guī)格：100mg/L(20℃)，基體：1％HCl  小鼠膀胱抗原(BTA)ELISA檢測(cè)試劑盒MouseBladdeumoraigen,BTAELISAKit 96T/48T  Humancoicoopin-releasingfactor，CRF人促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子(CRF)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

三環(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=2%)Tricyclazol solution質(zhì)量規(guī)格：10μg/ml,u=2%  人激動(dòng)異構(gòu)酶/細(xì)胞分裂素MB(CKMB)試劑盒 Human cytokinin MB,CKMB ELISA Kit  人傷寒抗原(St-Ag)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

氟樂靈標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=3%)Trifluralin solution質(zhì)量規(guī)格：100μg/ml,u=3%  RatCalfIestineAlkalinePhosphatase,CIAPELISAKit大鼠牛小腸堿性1酸酶(CIAP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  小鼠乙酰膽堿受體抗體(AChRab)試劑盒 Mouse acetylcholine receptor aibody,AChRab ELISA Kit
MouseActivinA,ACV-AELISA試劑盒小鼠活化素A(ACV-A)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  83-49-8豬去氧膽酸    Hyodeoxycholic acid

小鼠粘蛋白/粘液素1(MUC1)ELISA試劑盒 ，英文名： MUC1 ELISA Kit  89412-79-3竹節(jié)香附素A說明書  Raddeanin A

小鼠內(nèi)(ET)ELISA檢測(cè)試劑盒Mouseendotoxin,ETELISAKit 96T/48T  517-88-4紫草素品牌  shikonin

人相關(guān)抗原7(SPAG7)試劑盒 Human sperm associated aigen 7,SPAG7 ELISA Kit  28831-65-4紫草酸規(guī)格  Lithospermic acid

RatAndrostenedione,ASDELISAKit大鼠雄烯二同(ASD)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  118-34-3紫丁香苷   Syringin
219944-46-4七葉皂苷D品牌  AescinIIB   英文名稱RatProlactinELISAKit大鼠促乳素(Prolactin)規(guī)格：96T/48T

21967-41-9黃芩苷品牌  Baicalin   英文名稱RatProinsulinELISAKit大鼠原(PI)規(guī)格：96T/48T

21967-41-9黃芩苷品牌  Baicalin  英文名稱RatProinsulinELISAKit大鼠原(PI)規(guī)格：96T/48T

2188-68-3鹽酸石蒜堿規(guī)格  Lycorine chloride  英文名稱RatProgesteroneELISAkit大鼠孕激素(Progesterone)ELISAkit規(guī)格：96T/48T

2182-14-1文多靈品牌   Vindoline  英文名稱RatProgesteroneELISAkit大鼠孕激素(Progesterone)ELISAkit規(guī)格：96T/48T
小鼠誘導(dǎo)型多能干細(xì)胞（iPS細(xì)胞）OSKM-1（干細(xì)胞庫保藏）說明書小鼠中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶(NE)ELISA試劑盒 ，英文名： NE ELISA Kit  508-02-1齊墩果酸規(guī)格  Oleanolic acid

小鼠二(MDA)ELISA檢測(cè)試劑盒Mousemalondialchehyche,MDAELISAKit 96T/48T  52659-56-0奇任醇   Kirenol

人軍團(tuán)菌抗體IgG(LP Ab-IgG)試劑盒 Human Legionella aibody IgG,LP Ab-IgG ELISA Kit  千層紙素A-7-0-β-D-葡萄糖醛酸苷說明書   Oroxylin A 7-O-glucuronide

RatactivatedproteinC,APCELISAKit大鼠活化蛋白C(APC)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  480-11-5千層紙素A品牌   Oroxylin A

載玻片細(xì)胞RyR受體蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20  481-49-2千金藤素規(guī)格  Cepharanthine
收到小鼠誘導(dǎo)型多能干細(xì)胞（iPS細(xì)胞）OSKM-1（干細(xì)胞庫保藏）說明書處理方法
產(chǎn)品僅用于科研1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請(qǐng)拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。