SK-GT-2 冷凍保存細(xì)胞之方法：

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細(xì)胞凍存步驟：

資源名稱　SK-GT-2
種屬:人細(xì)胞

類型:貼壁

安全等級:1

模式菌株:未知

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:56

傳代方法:Protocol: 1.吸走完全培養(yǎng)基，輕柔加入3-5mL PBS潤洗細(xì)胞以除去多余培養(yǎng)基； 盡量吸干凈PBS，然后加入1mL 0.25%胰酶-0.53mM EDTA，輕輕搖晃培養(yǎng)皿使胰酶浸沒所有細(xì)胞表面，37度培養(yǎng)箱消化到細(xì)胞相互分離； Note:為避免細(xì)胞消化過度，細(xì)胞消化到相互分離，可以輕輕吹下即可終止，嚴(yán)禁消化到細(xì)胞完全漂浮。傳代過程吹打細(xì)胞應(yīng)盡量輕柔，不應(yīng)吹出過多氣泡。 2.加入6-8ml完全培養(yǎng)基終止消化，并輕輕混勻細(xì)胞； 3.將細(xì)胞懸液1000rpm（約150g）離心3min，棄上清； 4.用新的完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞并均勻分成幾份，37度培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)； 傳代比例: 視細(xì)胞生長速度而定，大部分細(xì)胞適用1:3-1:4傳代。

生長條件:Complete growth medium: 1640，90%；FBS，10%；雙抗。 Temperature: 37.0°C Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%
細(xì)胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復(fù)蘇手法對于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲存的zui好方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種：產(chǎn)品僅用于科研
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運輸也對細(xì)胞影響也不大，只需加25元運費(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞培養(yǎng)過程：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
以下是SK-GT-2 的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
右旋酮洛芬質(zhì)量規(guī)格：>98.5%(S)-(+)-Ketoprofen  Ratai-Thyroid-Peroxidaseaibody,TPO-AbELISA試劑盒大鼠抗甲狀腺過氧化物酶抗體(TPO-Ab)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  大鼠3氧代5α類4脫氫酶2(SRD5A2)試劑盒 Rat 3-oxo-5-alpha-steroid 4-dehydrogenase 2,SRD5A2 ELISA kit

甲氨蝶呤-甲基-d3質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口Methotrexate-methyl-d3  小鼠CD83分子(CD83)ELISA試劑盒 ，英文名： CD83 ELISA Kit  CLIAKitforS-100(MouseSolubleprotein-100)ELISAKit小鼠S100蛋白規(guī)格：48T/96T

4'-羥基尼美舒利質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口4'-Hydroxy Nimesulide  人降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)ELISA檢測試劑盒Humancalcitoningenerelatedpeptide,CGRPELISAKit 96T/48T  石蠟切片1脂皮爾斯(Pearse)直接染色試劑盒50

咪康唑質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口Miconazole  大鼠肝素結(jié)合EGF樣生長因子(HBEGF)試劑盒 Rat heparin-binding EGF-like growth factor,HBEGF ELISA kit  ELISAKitcAMP人環(huán)1酸腺苷規(guī)格：48T/96T
小鼠脂聯(lián)素(Acrp30)ELISA試劑盒 ，英文名： Acrp30 ELISA Kit  552-58-9圣草酚說明書  Eriodictyol

小鼠膽酯轉(zhuǎn)移蛋白(CETP)ELISA檢測試劑盒Mousecholesterolesteransferprotein,CETPELISAKit 96T/48T  152743-19-6石吊蘭素品牌  Lysionotin

人卷曲蛋白8(FZD8)試劑盒 human FZD8 ELISA Kit  108853-14-1石斛酚規(guī)格  dendrophenol

ratadrencocoicoopichormone,ACTHELISAKit大鼠促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  2115-91-5石斛堿   Dendrobine

載玻片細(xì)胞AIL蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒10/20  102518-79-6石杉堿甲說明書  Huperzine-A
4233-96-9沒食子兒茶素沒食子酸酯   GCG；Epigallocatechin gallate  載玻片細(xì)胞鈣ATP酶PMCA蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20

41753-43-9人參皂苷Rb1規(guī)格  Ginsenoside Rb1  載玻片細(xì)胞鈣ATP酶PMCA蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒10/20

41743-73-1野鳶尾黃素說明書  Irisflorentin    載玻片細(xì)胞蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒-LEPTIN10/20

4168-17-6長春質(zhì)堿   Catharanthine hemitartrate   載玻片細(xì)胞蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒-LEPTIN10/20

4136-37-2鹽酸水蘇堿   Stachydrine   載玻片細(xì)胞β脘蛋白(PRION)蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒10/20
SK-GT-2 人抗補體1q抗體(ai-C1q-aibody)試劑盒 Human ai-C1q-aibody ELISA Kit  3,5,6,7,8,3’,4’-七甲氧基黃酮規(guī)格  3,5,6,7,8,3’,4’-heptemthoxyflavone

RabbitTissuefactorpathwayinhibitor,TFPIELISAKit兔組織因子途徑抑制物(TFPI)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  873001-54-83,29-二苯甲?；闃侨嗜?   3,29-Dibenzoyl Rarounitriol

載玻片細(xì)胞CREB蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒10/20  3，6-二芥子?；崽钦f明書  3,6’－Disinapoyl sucrose

Humanβai-galactanproteinsIgGELISA試劑盒人β乳糖蛋白抗體IgGELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  117047-07-13’-甲氧基葛根素品牌  3’-MethoxyPuerarin

小鼠組織蛋白去乙?；?/span>(HD)ELISA試劑盒 ，英文名： HD ELISA Kit  3-羥基巴戟醌規(guī)格  3-Hydroxy-　morindone
收到SK-GT-2 處理方法
產(chǎn)品僅用于科研1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時再進(jìn)行傳代操作。