牦牛皮膚細(xì)胞培養(yǎng)冷凍保存細(xì)胞之方法：

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細(xì)胞凍存步驟：

資源名稱　牦牛皮膚細(xì)胞培養(yǎng)
種屬:BMU-S1

形態(tài):成纖維細(xì)胞樣

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:DMEM-H:Dulbecco＇sModifiedEagle＇sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)15%NBS

生長特性:貼壁生長
細(xì)胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲存的zui好方式，快遞時(shí)間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種：產(chǎn)品僅用于科研
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞培養(yǎng)過程：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
以下是牦牛皮膚細(xì)胞培養(yǎng)的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
魚藤酮質(zhì)量規(guī)格：>90%,BRRotenone  英文名稱MouseCCL24ELISAKit小鼠CCL24規(guī)格：96T/48T  大鼠粘蛋白/粘液素5B(MUC5B)ELISA試劑盒 ，英文名： MUC5B ELISA Kit

7-表紫杉醇（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品7-Epitaxol  冰凍切片組織衰老特異性晚期脂褐素鐵還原法(SCHMORL)染色試劑盒50  人抗核糖體P蛋白抗體(ARPA/Rib-P)ELISA檢測試劑盒Humanai-ribosomalPproteinaibody,ARPA/Rib-PELISAKit 96T/48T

澳洲茄胺;澳州茄胺（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Solasodine  Ratepidermalgrowthfactorreceptor,EGFRELISA試劑盒大鼠表皮生長因子受體(EGFR)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  大鼠白介素7(IL-7)試劑盒 Rat Ierleukin-7,IL-7 ELISA kit

紫花前胡苷（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Nodakenin  小鼠白介素17(IL17)ELISA試劑盒 ，英文名： IL17 ELISA Kit  CLIAKitfoGFBeta2ELISAKit大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β2規(guī)格：48T/96T
小鼠脂聯(lián)素(human adiponectin)ELISA試劑盒 ，英文名： human adiponectin ELISA Kit  2034-69-7西瑞香素規(guī)格  Daphnoretin

牛的牛血清白蛋白殘留檢測ELISA檢測試劑盒Bovinerudimealbovineserumalbumincheck-upELISAKit 96T/48T  177931-17-8三白草酮   Sauchinone

人AP-5復(fù)合物β亞基(PP1030)試劑盒 human PP1030 ELISA Kit  71610-00-9三尖杉寧堿說明書  Cephalomannine

英文名稱MouseIL-2sRαELISAkit小鼠白介素2可溶性受體α鏈(CD25)(IL-2sRα)規(guī)格：96T/48T  5302-45-4三七素品牌  dencichine

冰凍切片總膽高氯酸萘醌(PAN)染色試劑盒50  三七皂苷Fc規(guī)格  Notoginsenoside Fc
470-17-7異土木香內(nèi)酯說明書  isoalantolactone  真菌/酵母細(xì)胞總RNA分離試劑盒20

4684-32-6鴨腳樹葉堿說明書  2α,5α-Epoxy-1,2-dihydroakuammilan-17-oic acid methyl ester   真菌/酵母細(xì)胞線粒體分離(活性)試劑盒10

467-55-0?？略碥赵?guī)格  Hecogenin   真菌/酵母細(xì)胞線粒體分離(粗提)試劑盒10

466-26-2雪上一枝蒿乙素品牌  BullatineB  真菌/酵母細(xì)胞線粒體DNA萃取試劑盒10/20

466-24-0苯甲酰烏頭原堿   Benzoylaconitine   真菌/酵母細(xì)胞細(xì)胞壁分離試劑盒20
牦牛皮膚細(xì)胞培養(yǎng)人精氨酸酶2(ARG2)試劑盒 Human ARG2 ELISA Kit  104-46-1反式茴香腦說明書  cis-Anethol

Ratangiopoietieceptoie1,ANG-R-Tie1ELISAKit大鼠生成素受體Tie1(ANG-R-Tie1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  3,6′-二芥子?；崽瞧放?/span>  3, 6′-Disinapoyl Sucrose

載玻片細(xì)胞有絲分裂NBT顯色檢測試劑盒10/20  人參皂苷Rk1規(guī)格  Ginsenoside Rk1

MouseAlanineAminoansferase,ALT/GPTELISA試劑盒小鼠氨酸轉(zhuǎn)氨酶/谷轉(zhuǎn)氨酶(ALT/GPT)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  人參皂苷Rg6   Ginsenoside Rg6

小鼠載脂蛋白B100(Apo B100)ELISA試劑盒 ，英文名： Apo B100 ELISA Kit  130567-83-8羅漢果苷III說明書  Mogroside III
收到牦牛皮膚細(xì)胞培養(yǎng)處理方法
產(chǎn)品僅用于科研1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。⒓?xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。