人胚視網(wǎng)膜轉(zhuǎn)化細(xì)胞培養(yǎng)冷凍保存細(xì)胞之方法：

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細(xì)胞凍存步驟：

資源名稱　人胚視網(wǎng)膜轉(zhuǎn)化細(xì)胞培養(yǎng)
種屬:SL-3

形態(tài):上皮細(xì)胞樣

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle＇sBalancedSalts)10%FBS

生長特性:貼壁生長
細(xì)胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲存的zui好方式，快遞時(shí)間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種：產(chǎn)品僅用于科研
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞培養(yǎng)過程：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
以下是人胚視網(wǎng)膜轉(zhuǎn)化細(xì)胞培養(yǎng)的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
油酸酰胺(>65.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：>65.0%(GC)Oleamide  RabbitPlateletFactor4,PF-4ELISA試劑盒兔子血小板因子4(PF-4/CXCL4)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  人抗BP180抗體(BP180-Ab)ELISA試劑盒 ，英文名： BP180-Ab ELISA Kit

正辛酰胺(>98.0%(GC)(N))質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)(N)n-Octanamide  小鼠白介素11受體α(IL11Rα)ELISA試劑盒 ，英文名： IL11Rα ELISA Kit  RatLeukoieneC4,LT-C4ELISA試劑盒大鼠白三烯C4(LTC4)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

硬脂酰胺(>90.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：>90.0%(GC)Stearamide  人內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素(visfatin)ELISA檢測試劑盒HumanvisfatinELISAKit 96T/48T  HumangranzymesA,Gzms-AELISA試劑盒人顆粒酶A(Gzms-A)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

丁基鄰苯二甲酰羥乙酸丁酯(>95.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC)Butyl Phthalyl Butyl Glycolate  大鼠結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP)試劑盒 Rat Haptoglobin,Hpt/HP ELISA KIT  HumanLDL-ICELISAKit人復(fù)合物(LDL-IC)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
小鼠脂肪酸合成酶(FAS)ELISA試劑盒 ，英文名： FAS ELISA Kit  1617-53-4穗花杉雙黃酮規(guī)格  Amentoflavone

牛1酸果糖激酶(PFK)ELISA檢測試劑盒BovinePhosphofructokinase,PFKELISAKit 96T/48T  塔拉薩敏   talatisamine

人AFG3樣蛋白2(AFG3L2)試劑盒 Human AFG3L2 ELISA kit  21082-33-7苔黑酚葡萄糖苷說明書  Orcinol glucosid

英文名稱Mouse(IL-1sRI)ELISAkit小鼠白介素1可溶性受體I(IL-1sRI)規(guī)格：96T/48T  11031-45-1檀香醇品牌  Santalol

冰凍切片組織AKT蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20  479-98-1桃葉珊瑚苷規(guī)格   Aucubin
38412-46-3蘆薈寧品牌  Aloenin   載玻片細(xì)胞PAR-3蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒10/20

38395-02-7告達(dá)亭苷元規(guī)格  caudatin   載玻片細(xì)胞PAR-2蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒10/20

38390-45-3脫水長春堿說明書  3',4'-Anhydrovinblastine   載玻片細(xì)胞PAR-1蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20

38243-03-720(R)人參皂苷Rg3規(guī)格  20(R)Ginsenoside Rg3   載玻片細(xì)胞PAR-1蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒10/20

38226-86-7脫水淫羊藿素   Anhydroicaritin   載玻片細(xì)胞P38蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒10/20
人胚視網(wǎng)膜轉(zhuǎn)化細(xì)胞培養(yǎng)稀酰胺1公斤  81907-61-1靈芝酸B說明書  Ganoderic acid B

RatFibrinogen,FbgELISA試劑盒大鼠血纖蛋白原(Fbg)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  38412-46-3蘆薈寧品牌  Aloenin

小鼠組織多肽抗原(TPA)ELISA試劑盒 ，英文名： TPA ELISA Kit  5610-40-2一葉萩堿規(guī)格  Securinine

小鼠心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)ELISA檢測試劑盒MousecardiacoponinⅠ,cTn-ⅠELISAKit 96T/48T  511-96-6支脫皂苷元   Gitogenin

人抗促甲狀腺素受體抗體(Ab)試劑盒 human thyroid stimulating hormone receptor aidoby,Ab ELISA Kit  16562-13-3左旋千金藤啶堿說明書  L-Stepholidine
收到人胚視網(wǎng)膜轉(zhuǎn)化細(xì)胞培養(yǎng)處理方法
產(chǎn)品僅用于科研1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。