細(xì)胞培養(yǎng)過程：

產(chǎn)品僅用于科研冷凍保存細(xì)胞之方法：
C3H/An小鼠結(jié)締組織細(xì)胞（L929-TK-）培養(yǎng)冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

資源名稱　C3H/An小鼠結(jié)締組織細(xì)胞（L929-TK-）培養(yǎng)
種屬:LTK-

形態(tài):成纖維細(xì)胞樣

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:DMEM-H:Dulbecco＇sModifiedEagle＇sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS　

傳代方法:1:4~1:8傳代；每周2次換液。

生長(zhǎng)特性:貼壁生長(zhǎng)

存儲(chǔ)條件:基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS

細(xì)胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對(duì)于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對(duì)細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲(chǔ)存的zui好方式，快遞時(shí)間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對(duì)細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞凍存步驟：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
產(chǎn)品僅用于科研一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號(hào)16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

收到C3H/An小鼠結(jié)締組織細(xì)胞（L929-TK-）培養(yǎng)處理方法
1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請(qǐng)拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸浮）、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長(zhǎng)密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。
以下是C3H/An小鼠結(jié)締組織細(xì)胞（L929-TK-）培養(yǎng)的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
植酸(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：UV≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Phytic acid  Humancailageoligomericprotein,COMPELISA試劑盒人軟骨寡聚蛋白(COMP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  大鼠載脂蛋白H(Apo-H)ELISA試劑盒 ，英文名： Apo-H ELISA Kit

重樓皂苷I（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Polyphyllin I  轉(zhuǎn)基因棉花MON1445品系試劑盒20  人抗心肌抗體(AMA)ELISA檢測(cè)試劑盒HumanAi-myocardialaibody,AMAELISAKit 96T/48T

芝麻林素（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Sesamolin  HumansmoothmuscleMyosin,SMMELISAKit人平滑肌肌球蛋白(SMM)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  大鼠白介素4(IL-4)試劑盒 Rat Ierleukin 4,IL-4 ELISA KIT

芝麻素質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，BRSesamin  小鼠白介素15(IL15)ELISA試劑盒 ，英文名： IL15 ELISA Kit  CLIAKitfoGF-Beta1ELISAkit大鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1規(guī)格：48T/96T
載玻片細(xì)胞GSK-3ALPHA蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20  14605-22-2牛磺熊去氧膽酸規(guī)格   Tauroursodeoxycholic acid

Humanβ-lactamaseELISA試劑盒人β內(nèi)酰胺酶(β-lactamase)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  225937-10-0(+)兒茶素   (+)-Catechin hydrate

小鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白(F)ELISA試劑盒 ，英文名： F ELISA Kit  87205-99-0二氫丹參酮Ⅰ說明書  Dihydrotanshinone I

犬調(diào)節(jié)蛋白(TM)ELISA檢測(cè)試劑盒Caninethrombomodulin,TMELISAKit 96T/48T  76474-56-1二氫姜黃素品牌  DihydrocurcuMin

犬緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)試劑盒 Dog angiotensin Ⅱ,ANG-Ⅱ ELISA Kit  19408-84-5二氫辣椒堿規(guī)格  Dihydrocapsaicin
6681-18-1氯化木蘭花堿   Magnoflorine chloride  組蛋白H3-K4乙?；瘷z測(cè)試劑盒10/20等

66663-90-9桔梗皂苷D2   Platycodin D2   組蛋白H3-K4甲基化共沉淀分析試劑盒5

66575-29-9佛司可林規(guī)格  Forskolin   組蛋白H3-K4(mono/di/i)甲基化檢測(cè)試劑盒10/20等

66280-25-9戈米辛J   Gomisin J   組蛋白H3-K36乙?；瘷z測(cè)試劑盒10/20等

65604-80-0麥冬皂苷D'品牌  ophiopogonin D'  組蛋白H3-K36(mono/di/i)甲基化檢測(cè)試劑盒10/20等
C3H/An小鼠結(jié)締組織細(xì)胞（L929-TK-）培養(yǎng)不溶性GST融合蛋白溶解試劑盒10  78478-28-1白花前胡素E說明書  Praeruptorin E

ratfollicle-stimulatinghormone,FSHELISA試劑盒大鼠促卵泡素(FSH)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  129741-57-7白頭翁皂苷B4品牌  Anemoside B4

小鼠組織蛋白酶B(CTSB)ELISA試劑盒 ，英文名： CTSB ELISA Kit  484-29-7白鮮堿規(guī)格  Dictamnine

牛銅藍(lán)蛋白(CP)ELISA檢測(cè)試劑盒BovineCeruloplasmin,CPELISAKit 96T/48T  480-40-0白楊素   Chrysin

人Apelin 36(AP36)試劑盒 Human apelin 36,AP36 ELISA Kit  5986-55-0百秋李醇說明書  Patchouli alcohol