豬小腸上皮細(xì)胞說明書冷凍保存細(xì)胞之方法：

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細(xì)胞凍存步驟：

資源名稱　豬小腸上皮細(xì)胞說明書
種屬:IPEC-1

類型:貼壁

分離基物豬，小腸；上皮細(xì)胞；自發(fā)永生

安全等級(jí):1

模式菌株:未知

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:1640，90%；FBS，10%；雙抗

生長(zhǎng)條件:Temperature: 37.0°C Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%

存儲(chǔ)條件:Freeze medium: FBS/NBS, 92%; DMSO, 8%（for reference） Storage temperature: liquid nitrogen vapor phase
細(xì)胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對(duì)于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對(duì)細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲(chǔ)存的zui好方式，快遞時(shí)間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種：產(chǎn)品僅用于科研
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對(duì)細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞培養(yǎng)過程：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號(hào)16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
以下是豬小腸上皮細(xì)胞說明書的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
重樓皂苷I（標(biāo)準(zhǔn)品）Polyphyllin I質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品  小鼠組織蛋白去乙?；?/span>2(Hdac2/Yy1bp)ELISA試劑盒 ，英文名： Hdac2/Yy1bp ELISA Kit  組織氧化型谷胱甘肽(GSSG)濃度比色法定量檢測(cè)試劑盒50

芝麻林素（標(biāo)準(zhǔn)品）Sesamolin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品  小鼠凝血酶受體()ELISA檢測(cè)試劑盒Mousethrombieceptor,ELISAKit 96T/48T  Humanhemeoxygenase2,HO-2ELISAKit人血紅素氧合酶2(HO-2)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

芝麻素Sesamin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，BR  人抗補(bǔ)體1q抗體(ai-C1q-aibody)試劑盒 Human ai-C1q-aibody ELISA Kit  人緊張素原(aGT)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

芝麻素(標(biāo)準(zhǔn)品)Sesamin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品  RabbitTissuefactorpathwayinhibitor,TFPIELISAKit兔組織因子途徑抑制物(TFPI)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  豬神經(jīng)特異性烯醇化酶(NSE)試劑盒 Pig Neuron-specific enolase,NSE ELISA Kit
RabbitoponinⅠ,Tn-ⅠELISAKit兔肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  481-74-3大黃酚   Chrysophanol

載玻片細(xì)胞ERBETA蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20  518-82-1大黃素說明書  Emodin

humanβ2-microglobulin,BMG/β2-MGELISA試劑盒人β2微球蛋白(BMG/β2-MG)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  478-43-3大黃酸品牌  Rhein

小鼠阻抑素(PHB)ELISA試劑盒 ，英文名： PHB ELISA Kit  38840-23-2大黃素-1-O-葡萄糖苷規(guī)格  Emodin-1-O-glucoside

貓α干擾素(IFN-α)ELISA檢測(cè)試劑盒FelisIerferonα,IFN-αELISAKit 96T/48T  23313-21-5大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷   Emodin-8-glucoside
751-03-1黃柏酮   Obacunone   組織1酸葡萄糖異構(gòu)酶(phosphoglucoseisomerase;GPI)活性光譜法定量檢測(cè)試劑盒20

74805-92-8麥冬甲基黃烷酮A   Methylophiopogonanone A   組織1酸葡萄糖變位酶(phosphoglucomase;PGM)活性光譜法定量檢測(cè)試劑盒20

74805-92-8甲基麥冬二氫高異黃酮A品牌  Methylophiopogonanone A   組織1酸甲戊二羥酸激酶(phosphomevalonatekinase)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20

74805-91-7甲基麥冬二氫高異黃酮B規(guī)格  Methylophiopogonanone B   組織1酸果糖激酶(PHOSPHOFRUCTOKINASE)酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測(cè)試劑盒20

74805-90-6甲基麥冬黃酮A品牌  Methylophiopogonone A   組織1酸二酯酶5(PDE5)活性熒光定量檢測(cè)試劑盒10
豬小腸上皮細(xì)胞說明書RatIerleukin11,IL-11ELISA試劑盒大鼠白介素11(IL-11)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  484-20-8佛手柑內(nèi)酯   5-Methoxypsoralen

小鼠抑制素βC(INHβC)ELISA試劑盒 ，英文名： INHβC ELISA Kit  298-81-7花椒說明書  8-Methoxypsoralen

兔子可溶性粘附分子(Sam)ELISA檢測(cè)試劑盒Rabbitsolubleadhesionmolecules,SamELISAKit 96T/48T  465-99-6常春藤皂苷元品牌  Hederagenin

犬環(huán)加氧酶2(COX-2)試劑盒 Dog cyclooxygenase-2,COX-2 ELISA kit  10284-63-6D-松醇規(guī)格  3-O-Methyl-D-chiro-inositol; D-(+)-chiro-Inositol

英文名稱Humancardioophln-lELISAKit人心肌營(yíng)養(yǎng)素1(CT-1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  491-80-5鷹嘴豆芽素A   Biochanin A
收到豬小腸上皮細(xì)胞說明書處理方法
產(chǎn)品僅用于科研1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請(qǐng)拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。⒓?xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長(zhǎng)密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。