培養(yǎng)操作步驟：
人腦微內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布； 
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）； 
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)； 
4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中； 
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。產(chǎn)品僅用于科研 

資源名稱(chēng)　人腦微內(nèi)皮細(xì)胞
種屬:HBMEC

類(lèi)型:貼壁生長(zhǎng)

形態(tài):CM1-1培養(yǎng)液中，貼壁，上皮細(xì)胞樣，梭形

分離基物人，腦微；內(nèi)皮細(xì)胞

提供形式:復(fù)蘇形式：T25培養(yǎng)瓶1瓶；或者凍存形式：2ml凍存管2支，干冰費(fèi)另計(jì)。

安全等級(jí):1

模式菌株:未知

培養(yǎng)方法

傳代方法:將舊培養(yǎng)液吸除，PBS清洗兩遍后，加入6mL（/100mm皿）胰酶，在顯微鏡下觀察，期間禁止搖晃培養(yǎng)皿，細(xì)胞剛有脫落時(shí)，則吸除大部分胰酶，留約0.5mL，移至培養(yǎng)箱消化，約4min取出。傳代用12mL CM1-1培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打均勻細(xì)胞，后可分4~8皿培養(yǎng)；

生長(zhǎng)條件:37℃，5%CO2，CM1-1培養(yǎng)液。CM1-1培養(yǎng)液：90%DMEM-H+10%FBS。DMEM-H：DMEM高糖培養(yǎng)液，含谷氨酰胺，含丙酮酸鈉。

生長(zhǎng)特性:低密度時(shí)是多角形，高密度時(shí)是梭形。

存儲(chǔ)條件:凍存則用6mL凍存液（90%FBS+10%DMSO）終止消化，吹打均勻，分為6支凍存管，用程序降溫盒于-80℃凍存，過(guò)夜轉(zhuǎn)移至液氮中保存。

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類(lèi)型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用*化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備  記錄方式可采用攝影照片、縮時(shí)電影、電視等多種手段。
5.研究的范圍比較廣泛
應(yīng)用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣，如細(xì)胞學(xué)、免疫學(xué)、學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等； 
適用的對(duì)象范圍廣，從低等動(dòng)物到高等動(dòng)物，一種動(dòng)物的不同年齡階段以及不同組織，都可進(jìn)行有針對(duì)性的研究。
6.研究的費(fèi)用相對(duì)較經(jīng)濟(jì)可提供大量、同一時(shí)期、重復(fù)性好的、生物學(xué)性狀相似的實(shí)驗(yàn)對(duì)象。
以下是公司正在在熱銷(xiāo)的產(chǎn)品：
紫蓳靈（標(biāo)準(zhǔn)品）Corynoline質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品  小鼠組織因子(TF)ELISA試劑盒 ，英文名： TF ELISA Kit  組織緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)化酶1(ACE1)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20

紫云英苷（標(biāo)準(zhǔn)品）Astragaline質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品  鴨γ干擾素(IFN-γ)ELISA檢測(cè)試劑盒DuckIerferonγ,IFN-γELISAKit 96T/48T  HumanheparincofactorⅡ,HCⅡELISAKit人肝素輔因子Ⅱ(HCⅡ)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

棕櫚酸（標(biāo)準(zhǔn)品）Palmitic acid質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品  犬游離甲狀腺素(FT4)試劑盒 Canine Free Thyroxine,FT4 ELISA Kit  人內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF165)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

王不留行黃酮苷（標(biāo)準(zhǔn)品）Vaccarin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱(chēng)MouseBLC-1/CXCL13ELISAKit小鼠B-細(xì)胞趨化因子1(BLC-1/CXCL13)規(guī)格：96T/48T  豬生長(zhǎng)激素抑制素受體5(SS5)試劑盒 Pig Somatostatin receptor type 5,SS5 ELISA kit
犬胰島素(INS)試劑盒 Dog Insulin,INS ELISA Kit  38642-49-8苯甲酰芍藥苷規(guī)格  benzoylpaeoniflorin

英文名稱(chēng)Mouse8-iso-ProstaglandinF2a小鼠8-異素F2α規(guī)格：96T/48T  466-24-0苯甲酰烏頭原堿   Benzoylaconitine

部分蛋白酶切多肽譜分析試劑盒10  63238-66-4苯甲酰烏頭原堿說(shuō)明書(shū)  Benzoylhypacoitine

RatFollistatin,FSELISA試劑盒大鼠卵泡抑素(FS)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  63238-67-5苯甲酰新烏頭原堿品牌  Benzoylmesaconine

小鼠組酸豐富糖蛋白(HRG)ELISA試劑盒 ，英文名： HRG ELISA Kit  485-49-4比枯枯靈規(guī)格  (+)-Bicuculline
877822-41-8野馬追內(nèi)酯A規(guī)格  Eupalinolide A  組織半胱氨酸蛋白酶-12(CASPASE-12)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20

877822-40-7野馬追內(nèi)酯B   Eupalinolide B  組織半胱氨酸蛋白酶-10(CASPASE-10)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20

87701-68-6環(huán)氧澤瀉烯品牌  Alismoxide   組織半胱氨酸蛋白酶(CASPASE)總活性熒光定量檢測(cè)試劑盒20

87-52-5蘆竹堿品牌  Gramine  組織半胱氨酸(cysteine)含量比色法定量檢測(cè)試劑盒20

87480-46-4短葶山麥冬皂苷C品牌  Liriope muscari baily saponins C   組織氨含量熒光定量檢測(cè)試劑盒20
人腦微內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)RatFactor-relatedApoptosis,FASELISA試劑盒大鼠凋亡相關(guān)因子(FAS/CD95)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  117047-07-1別名：品牌  3’-Methoxy Puerarin

小鼠組織型纖溶酶原激活因子(tPA)ELISA試劑盒 ，英文名： tPA ELISA Kit  23445-00-3當(dāng)藥醇苷規(guī)格  Swertianolin 

鴨白介素1(IL-1)ELISA檢測(cè)試劑盒DuckIerleukin1,IL-1ELISAKit 96T/48T  2469-34-3遠(yuǎn)志皂苷元   Senegenin

犬抑制素β-B(Inhbb)試劑盒 Canine inhibin beta-B,Inhbb ELISA Kit  7518-22-1楤木皂苷A說(shuō)明書(shū)  Cantleyoside

英文名稱(chēng)MouseBTCELISAKit小鼠BTCELISAKit規(guī)格：96T/48T  吳茱萸苷品牌  Cantleyoside
操作流程：
1.1主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開(kāi),吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長(zhǎng)至60%～70%融合時(shí)，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。產(chǎn)品僅用于科研
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，以0.25％胰酶消化成單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中，每?jī)尚r(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100％，計(jì)算貼壁率。 
1.6 生長(zhǎng)曲線 取指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d，繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線
人腦微內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)來(lái)源可靠（源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等知名品牌），活力>95%，貼壁性好。我們從試劑、包被器皿、凍存原代細(xì)胞、新鮮原代細(xì)胞、原代細(xì)胞的分子學(xué)實(shí)驗(yàn)等提供全程服務(wù)。我司擁有專(zhuān)業(yè)的實(shí)驗(yàn)室，可無(wú)菌操作并提供相關(guān)科研項(xiàng)目解決方案以及實(shí)驗(yàn)服務(wù)。