人惡性非霍奇金患者的自然殺傷細胞 冷凍保存細胞之方法：

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細胞凍存步驟：

資源名稱　人惡性非霍奇金患者的自然殺傷細胞
種屬:NK-92MI

類型:懸浮生長

形態(tài):淋巴母細胞

分離基物NK細胞；；男性

提供形式:T25細胞培養(yǎng)瓶/凍存管

模式菌株:未知

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:90%RPMI-1640+10%FBS

生長條件:95%空氣+5%二氧化碳 37攝氏度

存儲條件:90%FBS+10%DMSO 液氮
細胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復(fù)蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大，一旦細胞狀態(tài)不好，很難說是細胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對細胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細胞儲存的zui好方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種：產(chǎn)品僅用于科研
是我們復(fù)蘇好細胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運輸也對細胞影響也不大，只需加25元運費(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。
細胞培養(yǎng)過程：

細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?/span>10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。
以下是人惡性非霍奇金患者的自然殺傷細胞 的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
CEM/C1(人急性細胞細胞) 5×106cells/瓶×2鹽酸D-甘露糖，英文名或英文縮寫：D-Mannosamine HC1，級別：高，98%，規(guī)格：25毫克

HUtSMC Pellet 人細胞團塊 > 1 mio.cells 人表皮角質(zhì)細胞-cDNAHEK-acDNA鱗醋硼,水合 BORON PHOSPHcTq 13308-21-2

CL-0098HCT-8(人盲腸腺癌細胞)5×106cells/瓶×23-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二本基溴化四氮唑噻唑藍，英文名或英文縮寫：MTT，級別：超，99%，規(guī)格：500克

RSPO1 Others Human 人 R-Spondin 1 / RSPO1 CHO細胞裂解液 (陽性對照) 二氧化鋯，英文名或英文縮寫：Zirconium dioxide，級別：5N，規(guī)格：25克

人小腦星形膠質(zhì)細胞裂解物HA-c LNeomycinSulfate 5g/25g/100g INALCO原裝
615小鼠株;Ca759二甲磺酸阿米三嗪（標準品）質(zhì)量規(guī)格：含量測定Almitrine Bismesylate

OSTM1 Others Human 人 OSTM1 人細胞裂解液 (陽性對照) 蘿巴新（標準品）質(zhì)量規(guī)格：含量測定Raubasine

AsoFectagen?星形細胞轉(zhuǎn)染試劑盒卡莫氟(標準品)質(zhì)量規(guī)格：供HPLC法含量測定用Carmofur

FGFR4 Others Human 人 FGFR4 / FGF Receptor 4 人細胞裂解液 (陽性對照) 尼可占替諾（煙酸占替諾）標準品質(zhì)量規(guī)格：供HPLC法含量測定用Xanthinol nicotinate

CatL2 家貓肺成纖維樣細胞鹽酸黃酮哌酯（標準品）質(zhì)量規(guī)格：含量測定Flavoxate
大鼠神經(jīng)皮質(zhì)細胞(RNc)(1×106) SW 1990 [SW-1990, SW1990] , 人*癌細胞 Human醌-2-磺酸鈉shēng huà shì jì容量：RT1毫克

人胚胎皮膚成纖維細胞;HES粘液酸 Mucic acid,98% 526-99-8 25G 通用試劑

SCN2B Others Human 人 SCN2B 人細胞裂解液 (陽性對照) 羌炳基-β-環(huán)糊精 xy7noxypropyl Bqtcdqx 18446-32-2

C57BL/6小鼠胚胎干細胞 C57BL/6 mouse embryonic stem cells超氧化物歧化酶(抽取法)測試盒50塊/箱

RPMI-8226細胞，人細胞 單核細胞增生李斯特氏菌 SV40T轉(zhuǎn)化人臍內(nèi)皮細胞;PUMC-HUVEC-T11866-15-5化乙酰硫代膽堿(+4℃)ACETYLTHIOCHOLINE IODIDE
人惡性非霍奇金患者的自然殺傷細胞 人口腔角質(zhì)細胞裂解物HOKL蛋白酶1底物2m，熒光Caspase 1 Substrate 2m (ICE),fluorogenic; Ac-YVAD-AMC質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

IGFBP6 Others Human 人 IGFBP6 / IBP-6 人細胞裂解液 (陽性對照) 蛋白酶3底物1m，熒光Caspase 3 Substrate 1m(Apopain), fluorogenic; Ac-DEVD-AMC質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

BRL-3A 大鼠正常肝細胞抗菌肽B;天蠶絲抗菌肽Cecropin B質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

CL-0118HT-29(人細胞)5×106cells/瓶×2卡律蝎Charybdotoxin質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

人絨毛間充質(zhì)成纖維細胞促皮質(zhì)素釋放因子，綿羊Corticotropin Releasing Factor,ovine質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR
收到人惡性非霍奇金患者的自然殺傷細胞 處理方法
產(chǎn)品僅用于科研1、首先，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。