小鼠胚胎成纖維細胞（干細胞庫保藏）形態(tài)冷凍保存細胞之方法：

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細胞凍存步驟：

資源名稱　小鼠胚胎成纖維細胞（干細胞庫保藏）形態(tài)
種屬:CF-1 MEF

類型:取孕12.5天的CF-1小鼠的胚胎制備獲得

形態(tài):成纖維細胞

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:MEF細胞完全培養(yǎng)基（100 ml）： DMEM (Invitrogen, 12430) 88 ml FBS (Biochrom, S0115) 10 ml Glutamax (Invitrogen, 35050) 1 ml Non-essential Amino Acids, 100? (Invitrogen, 11140) 1 ml 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度。
細胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復(fù)蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大，一旦細胞狀態(tài)不好，很難說是細胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對細胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細胞儲存的zui好方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種：產(chǎn)品僅用于科研
是我們復(fù)蘇好細胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運輸也對細胞影響也不大，只需加25元運費(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。
細胞培養(yǎng)過程：

細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?/span>10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。
以下是小鼠胚胎成纖維細胞（干細胞庫保藏）形態(tài)的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
HA Others H10N9 甲型 H10N9 (A/duck/HongKong/562/1979) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細胞裂解液 (陽性對照) 單甘油酯/甘油一酯質(zhì)量規(guī)格：單酯含量大于40%Monolaurin/1-Lauroyl-rac-glycerol

小鼠細胞完全培養(yǎng)基 100mL甘油單油酸酯/單油酸甘油酯質(zhì)量規(guī)格：度≥50%,油狀液體Monoolein

P3X63Ag8小鼠細胞 Mouse myeloma cell line P3X63Ag8 DMEM培養(yǎng)基+10%FBS1酸伐倫克林質(zhì)量規(guī)格：>98%Varenicline Tartrate

IL12A & IL12B Protein Mouse 重組小鼠 IL-12 (IL12A & IL12B Heterodimer) 蛋白1酸伐倫克林(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品Varenicline Tartrate

UMR-106(大鼠細胞) 5×106cells/瓶×2 HUVEC-12, 人臍內(nèi)皮細胞系1酸長春瑞賓/重1酸長春瑞賓質(zhì)量規(guī)格：>98%,USP,BRVinorelbine Tartrate
BE(2)-M17(人神經(jīng)母細胞瘤細胞) 5×106cells/瓶×2德瓦達合金，英文名或英文縮寫：Devarda's alloy，級別：GR，98%，規(guī)格：100克

HOB-c 人成骨細胞(HOB) 500,000cells 人真皮成纖維母細胞-新生HDF-n安普羅銨 cMproliuM 2011/2/2

C6, 大鼠腦細胞DL-α-基-β-羥基，英文名或英文縮寫：DL-Theronine，級別：BR，99%，規(guī)格：10g

FCGRT & B2M Others Mouse 小鼠 FCGRT & B2M Heterodimer 人細胞裂解液 (陽性對照) 磁性氧化鐵，英文名或英文縮寫：Ferrosoferric oxide，級別：5N，99.999%，規(guī)格：5克

大鼠腦內(nèi)皮細胞完全培養(yǎng)基 100mLBarbitalwo7ium 25g原裝/100g原裝 Sigma B0500
皮膚肥大細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)鐵(III)，英文名或英文縮寫：Ferric tartrate，級別：3N，規(guī)格：250克

幼蚊細胞;C6/36 大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤，PC-12細胞 HeLa 229(細胞)安基加醋銨　(+4℃) cMMONIUM CcRBcMcTq 1111-78-0

人上皮細胞;Hep-2馬來醋 Dibutyltin mclqctq 1978-4-6

PRMT6 Others Human 人 PRMT6 / HRMT1L6 人細胞裂解液 (陽性對照) 總脂酶測試盒【脂蛋白脂酶(LPL)shēng huà shì jì容量：RT1000支/包

犬腎細胞;MDCK(NBL-2)(腦心浸液
小鼠胚胎成纖維細胞（干細胞庫保藏）形態(tài)STK4 Others Human 人 STK4 / MST1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 多球殼菌素；嗜熱菌殺酵母素（來源于無孢霉群）Myriocin from Mycelia sterilia質(zhì)量規(guī)格：≥98%,sigma分裝

猞猁皮膚成纖維樣細胞;ELS1亞精胺鹽酸鹽Spermidine tri質(zhì)量規(guī)格：≥98%

BALB/3T3細胞，BALB/C小鼠胚成纖維細胞 人*癌細胞,PC-2細胞 CM-M024小鼠成纖維細胞完全培養(yǎng)基100mL栗精胺Castanospermine質(zhì)量規(guī)格：>98%,進分

大鼠細胞;UMR-106精胺四鹽酸鹽;鹽酸精胺Spermine tetra質(zhì)量規(guī)格：>98%,分子生物學(xué)級

CDH1 Others Human 人 Cadherin-1 / CDH1 / CD324 / E-cadherin 人細胞裂解液 (陽性對照) D-熒光素鉀鹽，D-蟲熒光素鉀鹽D-Luciferin potassium質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR
收到小鼠胚胎成纖維細胞（干細胞庫保藏）形態(tài)處理方法
產(chǎn)品僅用于科研1、首先，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。⒓毎螒B(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。