牛陀螺狀細(xì)胞培養(yǎng)冷凍保存細(xì)胞之方法：

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細(xì)胞凍存步驟：

資源名稱　牛陀螺狀細(xì)胞培養(yǎng)
種屬:BT

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:DMEM-H:Dulbecco＇sModifiedEagle＇sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%HS

生長(zhǎng)特性:貼壁生長(zhǎng)
細(xì)胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對(duì)于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對(duì)細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲(chǔ)存的zui好方式，快遞時(shí)間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種：產(chǎn)品僅用于科研
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對(duì)細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞培養(yǎng)過程：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號(hào)16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
以下是牛陀螺狀細(xì)胞培養(yǎng)的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
棕櫚酸甲酯(Standard for GC,≥98.0%(GC))Methyl palmitate質(zhì)量規(guī)格：Standard for GC,≥98.0%(GC)  小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶1(MMP-1)ELISA檢測(cè)試劑盒Mousemaixmetalloproteinase1,MMP-1ELISAkit 96T/48T  ELISAKitC4小鼠補(bǔ)體蛋白4規(guī)格：48T/96T

水楊酸甲酯(standard for GC,≥99.5%(GC))Methyl salicylate質(zhì)量規(guī)格：standard for GC,≥99.5%(GC)  人干細(xì)胞因子/肥大細(xì)胞生長(zhǎng)因子(SCF/MGF)試劑盒 Human SCF/MGF ELISA kit  Guineapigierleukin4,IL-4ELISAKit豚鼠白介素4(IL-4)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

油酸甲酯(Standard for GC,≥99%(GC))Methyl oleate質(zhì)量規(guī)格：Standard for GC,≥99%(GC)  RatInsulin,INSELISAKit大鼠(INS)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  人抗EB病毒抗體(EBV)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

癸氟奮乃靜（標(biāo)準(zhǔn)品）Fluphenazine Decanoate質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定  BrdU標(biāo)記法組織石蠟切片細(xì)胞繁殖NBT顯色檢測(cè)試劑盒10/20  小鼠環(huán)加氧酶2(COX-2)試劑盒 Mouse cyclooxygenase-2,COX-2 ELISA Kit
病毒包裝20樣本  （R型）原人參二醇規(guī)格  20(R)Protopanaxdiol

RatFibronectin,FNELISA試劑盒大鼠纖連蛋白(FN)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  (R型)原人參三醇   20(R)Protopanaxatriol

小鼠組織蛋白酶L(CTSL)ELISA試劑盒 ，英文名： CTSL ELISA Kit  （R型）人參皂苷Rh1說明書  20(R)Ginsenoside Rh1

綿羊白介素1β(IL-1β)ELISA檢測(cè)試劑盒SheepIerleukin1β,IL-1βELISAKit 96T/48T  （R型）人參皂苷Rh2品牌  20(R)Ginsenoside Rh2

犬樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3(IGFBP3)試劑盒 Dog insulin-like growth factor binding protein 3,IGFBP3 ELISA kit  15356-70-4DL-薄荷醇規(guī)格  DL-Menthol
952068-64-3巴利森苷D規(guī)格  Parishin D    組織基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-3)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20

952068-57-4巴利森苷E說明書  Parishin E    組織基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-2)生物素明膠法比色定量檢測(cè)試劑盒20

95041-90-0毛蘭素別名：品牌  Erianin  組織基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-2)捕獲檢測(cè)試劑盒20

94987-08-3絞股藍(lán)皂苷   Stevenleaf   組織基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-2)活性熒光定量檢測(cè)試劑盒20

94987-08-3絞股藍(lán)皂苷XLIX   Gypenoside XLIX   組織基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-13)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20(10樣本)
牛陀螺狀細(xì)胞培養(yǎng)ratai-cardiolipinaibodyIgM,ACA-IgMELISAKit大鼠抗心1脂抗體IgM(ACA-IgM)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  19275-46-83-異倒捻子素   3-isomangostin

組蛋白H2B-K16乙?；瘷z測(cè)試劑盒10/20等  20931-37-7β-倒捻子素說明書  Beta-mangostin

MouseAndrostenedione,ASDELISA試劑盒小鼠雄烯二同(ASD)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  98243-57-3梭砂貝母堿品牌  Hupehenine

小鼠游離狀腺原酸(Free-T3)ELISA試劑盒 ，英文名： Free-T3 ELISA Kit  541-15-1左旋肉堿規(guī)格  L-carnitine

小鼠髓過氧化物酶特異性抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體IgG(MPO-ANCAIgG)ELISA檢測(cè)試劑盒Mousemyeloperoxidase-aineuophilcytoplasmicaibodyIgG,MPO-ANCAIgGELISAkit 96T/48T  39262-14-1人參皂苷CK   Ginsenoside CK
收到牛陀螺狀細(xì)胞培養(yǎng)處理方法
產(chǎn)品僅用于科研1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請(qǐng)拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。⒓?xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長(zhǎng)密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。