細胞培養(yǎng)過程：

產(chǎn)品僅用于科研冷凍保存細胞之方法：
人臍內(nèi)皮細胞形態(tài)冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

資源名稱　人臍內(nèi)皮細胞形態(tài)
種屬:HUVEC

類型:貼壁生長

形態(tài):CM15-1培養(yǎng)液中，貼壁，上皮細胞樣，多角形，短粗的梭形

分離基物人，臍；內(nèi)皮細胞。女性，年齡未指明，有限細胞系

提供形式:凍存管/T25細胞瓶

安全等級:1

模式菌株:未知

應(yīng)用領(lǐng)域可用于內(nèi)皮修復(fù)損傷的研究。

培養(yǎng)方法

傳代方法:將舊培養(yǎng)液吸除，PBS清洗兩遍后，加入6mL（/100mm皿）胰酶，在顯微鏡下觀察，期間禁止搖晃培養(yǎng)皿，細胞剛有脫落時，則吸除大部分胰酶，留約0.5mL，移至培養(yǎng)箱消化，約3min取出。傳代用12mL CM15-1培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打均勻細胞，后可分3~6皿培養(yǎng)；

生長條件:37℃，5%CO2，CM15-1培養(yǎng)液。CM15-1培養(yǎng)液：90%F-12K+10%FBS+0.1mg/mL heparin+0.03~0.05mg/mLECGS。F-12K：F-12K培養(yǎng)液。生長因子：heparin（肝素），ECGS（內(nèi)皮細胞生長添加劑）。

存儲條件:凍存則用6mL凍存液（90%FBS+10%DMSO）終止消化，吹打均勻，分為6支凍存管，用程序降溫盒于-80℃凍存，過夜轉(zhuǎn)移至液氮中保存。

細胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復(fù)蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大，一旦細胞狀態(tài)不好，很難說是細胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對細胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細胞儲存的zui好方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運輸也對細胞影響也不大，只需加25元運費(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。
細胞凍存步驟：

細胞培養(yǎng)步驟：
產(chǎn)品僅用于科研一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?/span>10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。

收到人臍內(nèi)皮細胞形態(tài)處理方法
1、首先，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸浮）、細胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。
以下是人臍內(nèi)皮細胞形態(tài)的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
HL-7702(人肝正常細胞) 5×106cells/瓶×2 RLF, 大鼠成纖維細胞 人類成纖維細胞系;CNLMG-B5538SKIN銅標(biāo)準溶液（500mg/l,溶劑:1%硫酸）質(zhì)量規(guī)格：500mg/l,溶劑:1%硫酸Copper solution

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細胞;KM932鉻標(biāo)準溶液（三價鉻標(biāo)準溶液1000μg/ml）質(zhì)量規(guī)格：三價鉻標(biāo)準溶液1000μg/mlChromium solution

MERTK Others Human 人 MERTK / Mer 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 1酸二氫鈉一水(ACS級)質(zhì)量規(guī)格：ACS級,>98.5% phosphate, monobasic, monohydrate

CM-H046人肝星形細胞完全培養(yǎng)基100mL葡萄糖酸鈣質(zhì)量規(guī)格：>99%Calcium gluconate, hydrate

HL-60, 人早幼粒細胞 單核細胞-巨噬細胞,RAW264.7細胞 Hep G2(人細胞)十二烷基-β-D-麥芽糖苷;月桂?；溠刻擒召|(zhì)量規(guī)格：>99%,分子生物學(xué)級N-Dodecyl-b-maltoside
caski L-順式-鹽酸地爾硫卓質(zhì)量規(guī)格：美國進口L-cis-Diltiazem ? HCl

Hepa1-6-EGFP(CMV-GFP慢病毒構(gòu)建穩(wěn)定株)小鼠細胞 Hepa1-6-EGFP (CMV-GFP leiviral consuct stable sain) of hepatocellular carcinoma cells in mice DMEM+10% FBS地爾硫卓質(zhì)量規(guī)格：美國進口Diltiazem

TNFSF11 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 RANKL / OPGL / TNFSF11 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)去乙酰地爾硫卓-d3質(zhì)量規(guī)格：美國進口Desacetyl Diltiazem-d3

人主動脈平滑肌細胞 (HASMC)( 5×105 ) HK-2, 人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細胞 HumanO-去甲基地爾硫卓質(zhì)量規(guī)格：美國進口O-Desmethyl Diltiazem

小鼠B細胞雜交瘤細胞;SH2地美司鈉-d8質(zhì)量規(guī)格：美國進口Dimesna-d8
MA, 小鼠星形膠質(zhì)細胞 Mouse無水錄化鈷100克

ICAM2 Others Mouse 小鼠 ICAM2 / CD102 人細胞裂解液 (陽性對照) 姆沙伯 W NAW Chromosorb W-NcW

人T瘤轉(zhuǎn)基因細胞;Jurkat D,E植酸鈉 Phytic Acid  (InsP6) 14306-25-3 5G 通用試劑

NOTCH1 Others Mouse 小鼠 Notch-1 / NOTCH1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 葡萄糖胰蛋白胨瓊脂25毫升

CM-R030大鼠腸粘膜上皮細胞完全培養(yǎng)基100mL(糊精)
人臍內(nèi)皮細胞形態(tài)PVRL3 Others Human 人 PVRL3 / CD113 人細胞裂解液 (陽性對照) 二乙二醇二丁基(>98.0%(GC))Diethylene Glycol Dibutyl Ether質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)

人內(nèi)根殼細胞裂解物HHIRSCL二乙二醇二乙酸酯(>98.0%(GC))Diethylene Glycol Diacetate質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)

CHODL Others Rat 大鼠 CHODL / CHOndrolectin 人細胞裂解液 (陽性對照) 三甘醇二乙酸酯(>98.0%(GC))Triethylene Glycol Diacetate質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)

人腦微內(nèi)皮細胞完全培養(yǎng)基 100mLO-乙酰基蓖麻酸甲酯(>80.0%(GC))Methyl O-Acetylricinoleate質(zhì)量規(guī)格：>80.0%(GC)

MC3T3-E1細胞，小鼠成骨細胞系 V79(中國倉鼠肺細胞) 家兔骨髓間充質(zhì)干細胞;2012083MSC檸檬酸三乙酯(>99.0%(GC))Triethyl 質(zhì)量規(guī)格：>99.0%(GC)