資源名稱　小鼠胚胎成纖維細(xì)胞產(chǎn)品僅用于科研
種屬:3T3-L1

類型:貼壁生長(zhǎng)

形態(tài):CM1-1培養(yǎng)液中，貼壁，成纖維細(xì)胞樣，細(xì)胞形態(tài)比較大

分離基物小鼠，胚胎，成纖維

提供形式:凍存管/T25培養(yǎng)瓶

安全等級(jí):1

模式菌株:未知

培養(yǎng)方法

傳代方法:將舊培養(yǎng)液吸除，PBS清洗兩遍后，加入6mL（/100mm皿）胰酶，在顯微鏡下觀察，期間禁止搖晃培養(yǎng)皿，細(xì)胞剛有脫落時(shí)，則吸除大部分胰酶，留約0.5mL，移至培養(yǎng)箱消化，約3min取出。傳代用12mL CM1-1培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打均勻細(xì)胞，后可分3~6皿培養(yǎng)；

生長(zhǎng)條件:37℃，5%CO2，CM1-1培養(yǎng)液。CM1-1培養(yǎng)液：90%DMEM-H+10%FBS。DMEM-H：DMEM高糖培養(yǎng)液，含谷氨酰胺，丙酮酸鈉。

存儲(chǔ)條件:凍存則用6mL凍存液（90%FBS+10%DMSO）終止消化，吹打均勻，分為6支凍存管，用程序降溫盒于-80℃凍存，過(guò)夜移至液氮中保存。
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞形態(tài)來(lái)源可靠（源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等知名品牌），活力>95%，貼壁性好。我們從試劑、包被器皿、凍存原代細(xì)胞、新鮮原代細(xì)胞、原代細(xì)胞的分子學(xué)實(shí)驗(yàn)等提供全程服務(wù)。我司擁有專業(yè)的實(shí)驗(yàn)室，可無(wú)菌操作并提供相關(guān)科研項(xiàng)目解決方案以及實(shí)驗(yàn)服務(wù)。

培養(yǎng)操作步驟：
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞形態(tài)1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布； 
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）； 
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)； 
4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中； 
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。 
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用*化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備  記錄方式可采用攝影照片、縮時(shí)電影、電視等多種手段。
5.研究的范圍比較廣泛
應(yīng)用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣，如細(xì)胞學(xué)、免疫學(xué)、學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等； 
適用的對(duì)象范圍廣，從低等動(dòng)物到高等動(dòng)物，一種動(dòng)物的不同年齡階段以及不同組織，都可進(jìn)行有針對(duì)性的研究。
6.研究的費(fèi)用相對(duì)較經(jīng)濟(jì)可提供大量、同一時(shí)期、重復(fù)性好的、生物學(xué)性狀相似的實(shí)驗(yàn)對(duì)象。

操作流程：
產(chǎn)品僅用于科研1.1主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開(kāi),吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長(zhǎng)至60%～70%融合時(shí)，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，以0.25％胰酶消化成單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中，每?jī)尚r(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100％，計(jì)算貼壁率。 
1.6 生長(zhǎng)曲線 取指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d，繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線

以下是公司正在在熱銷的產(chǎn)品：
DKK1 Others Human 人 DKK1 / Dkk-1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 黃芪甲苷質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRAstragaloside IV

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細(xì)胞;KMY0902那格列奈（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品Nateglinide

KLRB1A Others Mouse 小鼠 NKR-P1A / Klrb1a 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 帕米1酸二鈉質(zhì)量規(guī)格：>99%,五水合物Pamidronate Di

H125 人細(xì)胞帕米1酸二鈉（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品Pamidronate Di

DLD-1人結(jié)直腸腺癌上皮細(xì)胞 DLD-1 human colorectal cancer cell line 1640+10% FBS硫酸慶大霉素質(zhì)量規(guī)格：>590IU/MG,BRGentamicin sulfate
CD34 Others Human 人 CD34 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 甘草酸(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Glycyrrhizic acid

小鼠漿細(xì)胞瘤;MPC-11甘草酸單銨鹽(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Glycyrrhizic acid ammonium salt

PTGDS Others Human 人 PTGDS / L-PGDS 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 甘草酸單銨鹽質(zhì)量規(guī)格：UV>97%,無(wú)水物,BRGlycyrrhizic acid ammonium salt

人食管平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL甘草酸二銨鹽（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：UV≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Diammonium Glycyrrhizate

7WPS1細(xì)胞，人APP-PS1雙基因轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞株 變異鏈球菌 兔間變表皮鱗株;VX2甘草酸二銨鹽質(zhì)量規(guī)格：UV≥97%,BRDiammonium Glycyrrhizate
AGO3 Others Human 人 AGO3 / Argonaute 3 / EIF2C3 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 二本基聯(lián)本胺shēng huà shì jì容量：2～8℃10毫升

小鼠正常肝細(xì)胞;NCTC 1469 [NCTC1469]加醋 ChroMiuM Picolinctq 14639-2-9

MDA-MB-453細(xì)胞，癌細(xì)胞 人食管鱗癌,KYSE 450細(xì)胞 中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(亞系*);CHO-beta2(414) CL.32 pTGF-beta2(414)聚乙二醇 20000 Poly(ethylene glycol) 20,000 (PEG 20000) 25322-68-3 500G 通用試劑

小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞;PUMC-mips-D2草酸亞錫shēng huà shì jì容量：RT10克

HA Others H1N1 甲型 H1N1 (A/Brisbane/59/2007) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) DL-Malicacid 100g/250g/500g/1kg原裝 Sigma M0875
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞形態(tài)BMPR2 Others Human 人 BMPR-II 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 反式玉米素trans-Zeatin質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)

人膀胱基質(zhì)成纖維細(xì)胞總RNAHBdSF NA氯亞鉑酸鉀 Dipotassium tetrachloroplatinate質(zhì)量規(guī)格：BR,鉑含量 ≥46%,原始鉑粉度＞99.95%

ATF2 Others Human 人 ATF2 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 環(huán)黃芪醇Cycloastragenol質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(亞系*);CHO Hu 164 SCF 17馬兜鈴酸AAristolochic acid A質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

QGY-7703細(xì)胞，細(xì)胞 表皮癌細(xì)胞系,A431細(xì)胞 小鼠網(wǎng)織細(xì)胞;M5076羥基茜草素/紅紫素（標(biāo)準(zhǔn)品）Purpurin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品