大鼠心肌細(xì)胞 冷凍保存細(xì)胞之方法：

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細(xì)胞凍存步驟：

資源名稱　大鼠心肌細(xì)胞
種屬:H9c2(2-1)

類型:貼壁生長

形態(tài):CM1-1培養(yǎng)液中，貼壁，上皮樣細(xì)胞，長梭形

提供形式:復(fù)蘇形式：T25培養(yǎng)瓶1瓶；或者凍存形式：2ml凍存管2支，干冰費(fèi)另計(jì)。

安全等級(jí):1

模式菌株:未知

應(yīng)用領(lǐng)域h9c2細(xì)胞系是研究*藥物代謝酶的一種有價(jià)值的體外模型。h9c2細(xì)胞系和新生心肌細(xì)胞在體外表現(xiàn)出類似的肥大反應(yīng)。

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:90%高糖DMEM+10%FBS

傳代方法:將舊培養(yǎng)液吸除，PBS清洗兩遍后，加入6mL（/100mm皿）胰酶，在顯微鏡下觀察，期間禁止搖晃培養(yǎng)皿，細(xì)胞剛有脫落時(shí)，則吸除大部分胰酶，留約0.5mL，移至培養(yǎng)箱消化，約2min取出。傳代用12mL CM1-1培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打均勻細(xì)胞，后可分3~6皿培養(yǎng)

生長條件:37℃，5%CO2，CM1-1培養(yǎng)液。CM1-1培養(yǎng)液：90%DMEM-H+10%FBS。DMEM-H：DMEM高糖培養(yǎng)液，含谷氨酰胺，含丙酮酸鈉。

存儲(chǔ)條件:凍存則用6mL凍存液（90%FBS+10%DMSO）終止消化，吹打均勻，分為6支凍存管，用程序降溫盒于-80℃凍存，過夜轉(zhuǎn)移至液氮中保存。
細(xì)胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對(duì)于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對(duì)細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲(chǔ)存的zui好方式，快遞時(shí)間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種：產(chǎn)品僅用于科研
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對(duì)細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞培養(yǎng)過程：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號(hào)16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
以下是大鼠心肌細(xì)胞 的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
TNFSF10 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 TNFSF10 / AIL / APO-2L 蛋白鹽酸度洛西汀質(zhì)量規(guī)格：>99%,BRDuloxetine hcl

人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(骨髓)(HMSC-bm)(5×105) MGC80-3(MGC-803)人細(xì)胞 Human鹽酸度洛西汀(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品Duloxetine hcl

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細(xì)胞;KMY0905克拉霉素質(zhì)量規(guī)格：>97%,USP34,BRClarithromycin

人臍帶動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞 (HUASMC)( 5×105 )克拉霉素（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC>95%,標(biāo)準(zhǔn)品Clarithromycin

CM-H072人腎成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL克林霉素1酸酯質(zhì)量規(guī)格：克林霉素含量>758μg/mg,USP32Clindamycin Phosphate
CD40LG Protein Canine 重組狗 CD40L / CD154 / TNFSF5 蛋白西司他丁質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口Cilastatin

人心肌細(xì)胞 (HCM) (1×106 ) HET-1A, 人食管上皮細(xì)胞 Human西司他丁鈉質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口Cilastatin

小鼠垂體細(xì)胞MPC奧卡西平1醇-硫酸質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口Oxcarbazepine Enol-sulfate

EPHA4 Others Cynomolgus 食蟹猴 EphA4 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 奧卡西平-D4(主要的)質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口Oxcarbazepine-D4 (Major)

大鼠成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL二氫酮酸甲酯(植物激素級(jí))質(zhì)量規(guī)格：>90%,植物激素級(jí)Methyl dihydrojasmonate
人表皮色素細(xì)胞-淺色素cDNAHEM-l cDNA4-(二甲基)25克RT

CD274 Others Rat 大鼠 PD-L1 / B7-H1 / CD274 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 姆沙伯 G HP Chromosorb G-HP

小鼠樹突狀細(xì)胞低轉(zhuǎn)移細(xì)胞(綠色熒光蛋白標(biāo)記);DG6-GFP聚乙二醇 300 Poly(ethylene glycol) 300 (PEG 300) 25322-68-3 250ML 通用試劑

小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞;PUMC-mips-B5 I型膠原酶(含100mL酶解緩沖液) 10mLL-MINEL-甲(蛋酸)美國藥典級(jí)25G63-68-3COLD

Saos-2，人成細(xì)胞 Human38256-93-8N-(2-甲氧基乙基)甲基胺N-(2-metxOXYetxyl)metxYLAMINE
大鼠心肌細(xì)胞 TE-10(人細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2防己諾林堿Fangchinoline質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

HMy2.CIR(人B母細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 mOPC, 小鼠少突膠質(zhì)前體細(xì)胞 人皮膚成纖維細(xì)胞;HSAS4澳茄新堿Solasurine質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

人膀胱上皮永生化細(xì)胞;SV-HUC-1五水合硫酸金雀花堿/硫酸鷹爪豆堿(標(biāo)準(zhǔn)品)Sparteini Sulfas質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

CSF1R Others Rat 大鼠 CSF1R / MCSF Receptor / CD115 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 五水合硫酸金雀花堿/硫酸鷹爪豆堿(-)-Sparteini Sulfas質(zhì)量規(guī)格：≥97%,BR

CM-H050人胎盤羊膜細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL辛弗林(標(biāo)準(zhǔn)品)Synephrine質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品
收到大鼠心肌細(xì)胞 處理方法
產(chǎn)品僅用于科研1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請(qǐng)拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。