豬肺泡巨噬細(xì)胞說(shuō)明書冷凍保存細(xì)胞之方法：

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細(xì)胞凍存步驟：

資源名稱　豬肺泡巨噬細(xì)胞說(shuō)明書
種屬:3D4/21

類型:貼壁生長(zhǎng)

形態(tài):巨噬細(xì)胞樣

分離基物肺泡巨噬細(xì)胞；SV40轉(zhuǎn)化；Landrace

提供形式:T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶/凍存管

安全等級(jí):2

模式菌株:未知

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:90%高糖DMEM（含4mM L-谷氨酰胺、丙酮酸鈉）+10%FBS

傳代方法:60mm培養(yǎng)皿，1ml 0.25%胰酶常溫下消化時(shí)間5-6分鐘。

生長(zhǎng)條件:95%空氣+5%二氧化碳 37攝氏度

存儲(chǔ)條件:90%FBS+10%DMSO 液氮
細(xì)胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對(duì)于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說(shuō)是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒(méi)操作好；另外溫度對(duì)細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲(chǔ)存的zui好方式，快遞時(shí)間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種：產(chǎn)品僅用于科研
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過(guò)后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對(duì)細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來(lái)源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號(hào)16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
以下是豬肺泡巨噬細(xì)胞說(shuō)明書的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
BST2 Others Human 人 TETHERIN / BST2 / CD317 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 鹽酸萬(wàn)古霉素(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定Vancomycin HCl

C57BL/6小鼠胚胎干細(xì)胞 C57BL/6 mouse embryonic stem cells凡德他尼質(zhì)量規(guī)格：>99%,可用于細(xì)胞培養(yǎng)Vandetanib

Hp2/o細(xì)胞，人跟細(xì)胞 赭曲霉 人胚;HFL-I海帶多糖；昆布糖 (來(lái)自褐藻類)質(zhì)量規(guī)格：BR，日本進(jìn)口分裝Laminarin from Laminaria digitata

SW 1990(人*癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2胰酶(1:250)，胰酶粉質(zhì)量規(guī)格：酶活1:250,BRPancreatin

HGC-27(人細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(EGFP標(biāo)記) 人臍內(nèi)皮細(xì)胞;HUV-EC-C木瓜蛋白酶(800u/mg)質(zhì)量規(guī)格：800u/mgPapain
CEM/C1(人急性細(xì)胞細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 人髓核細(xì)胞HNPC腺苷 5‘-（α,β-亞甲基）二1酸鹽，鈉鹽質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口Adenosine 5'-(α,β-methylene)diphosphate,  salt

主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml) 5'-O-(4,4'-二甲氧基三苯甲基)-N6-苯甲?；佘?/span> 質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口N6-Benzoyl-5'-O-DMT-adenosine

AK4 Others Human 人 AK4 / Adenylate Kinase 4 / AK3L1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 8-疊氮腺苷質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口8-Azido Adenosine 

中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞系;pDSr a2-mpl-X2-肼基腺苷質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口2-Hydrazino Adenosine

Mo-MuLv/3T3細(xì)胞，Mo-MuLv感染的3T3細(xì)胞 人*癌細(xì)胞,SFPAC-1細(xì)胞 CM-M056小鼠腎實(shí)質(zhì)細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL腺苷3',5'-環(huán)單1酸鹽，N6-苯甲酰-鈉鹽質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口Adenosine 3′,5′-cyclic Monophosphate, N6-Benzoyl-,  Salt
ST6GAL1 Others Mouse 小鼠 ST6GAL1 / CD75 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 間本二酸二1酯shēng huà shì jì容量：保存：-20℃5毫升

HEL(懸浮) 紅白細(xì)胞細(xì)胞甲基-β-環(huán)糊精 Methyl-β-cyclodextrin 128446-36-6 1G 通用試劑

HEC-1-A人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞 HEC-1-A human endomeial adenocarcinoma cells McCOY's 5A+10%FBS啊利新藍(lán) Ingrcin Bluq 1 33864-99-

TNFSF13B Protein Human 重組人 BLyS / TNFSF13B / BAFF 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)DEAE纖維素DE-23shēng huà shì jì容量：5毫升

大鼠海馬趾神經(jīng)細(xì)胞(RHh)(1×106) WM451, 人色素瘤細(xì)胞 Human15067-26-2氘代苊ACEnepxtxene-D10
豬肺泡巨噬細(xì)胞說(shuō)明書PDIA4 Others Human 人 ERP72 / PDIA4 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 氟米龍醋酸酯Fluorometholone Acetate質(zhì)量規(guī)格：>97%

狗骨髓間質(zhì)干細(xì)胞 The dog bone marrow mesenchymal stem cells十溴二苯Pentabromophenyl ether質(zhì)量規(guī)格：>98%

HME7細(xì)胞，人色素瘤細(xì)胞 短雙歧桿菌 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細(xì)胞;HH-29氨基雜環(huán)鹽酸鹽3-Amino-3-azabicyclo[3.3.0]octane 質(zhì)量規(guī)格：>98%

UM-UC-3(人膀胱移行細(xì)胞癌) 5×106cells/瓶×2春雷霉素;春日霉素; 克死霉Kasugamycin質(zhì)量規(guī)格：>60%,BR

HUVEC(HUV-EC-C) (人臍內(nèi)皮細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 SW 1990 [SW-1990, SW1990] , 人*癌細(xì)胞 人癌細(xì)胞;MDA-MB-435S土拉霉素A，托拉菌素A,泰拉霉素Tulathromycin A質(zhì)量規(guī)格：>95%
收到豬肺泡巨噬細(xì)胞說(shuō)明書處理方法
產(chǎn)品僅用于科研1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請(qǐng)拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸浮）、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長(zhǎng)密度超過(guò)80%，可正常傳代；若未超過(guò)80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無(wú)菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過(guò)80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過(guò)80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。