猞猁皮膚成纖維樣細(xì)胞 冷凍保存細(xì)胞之方法：

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細(xì)胞凍存步驟：

資源名稱　猞猁皮膚成纖維樣細(xì)胞
種屬:ELS1

形態(tài):成纖維細(xì)胞樣

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:M-199:withEarle＇sBalancedSaltsSolution(EBSS)10%FBS

生長特性:貼壁生長
細(xì)胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復(fù)蘇手法對于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲存的zui好方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種：產(chǎn)品僅用于科研
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞培養(yǎng)過程：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
以下是猞猁皮膚成纖維樣細(xì)胞 的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
人細(xì)胞;1301草酸鈉(>98%，BC)質(zhì)量規(guī)格：>98%，BC oxalate

HA Others H3N2 甲型 H3N2 (A/Wyoming/03/2003) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 鎢酸鈉二水(>質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR  tungstate, dehydrate

HET-1A, 人食管上皮細(xì)胞孔雀綠質(zhì)量規(guī)格：IND gradeMalachite green

NA Others H5N1 甲型 H5N1 (A/Thailand/1(KAN-1)/2004) 神經(jīng)氨酸酶 (Neuraminidase / NA) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 聚乙二醇2000質(zhì)量規(guī)格：M.W:2000PEG 2000

人羊膜細(xì)胞;WISH硫代氨基脲(AR)質(zhì)量規(guī)格：AR,>98%Thiosemicarbazide
CL-0098HCT-8(人盲腸腺癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2澤瀉醇B醋酸酯(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Alisol B 23-acetate

RSPO1 Others Human 人 R-Spondin 1 / RSPO1 CHO細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 獐牙菜苷（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Sweroside

人小腦星形膠質(zhì)細(xì)胞裂解物HA-c L獐牙菜苦苷(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Swertiamarin

新生牛眼Tenon's囊成纖維細(xì)胞;NBTF 腺癌細(xì)胞，RKO細(xì)胞 TA2細(xì)胞，小鼠自發(fā)高癌細(xì)胞樟腦（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥96%，標(biāo)準(zhǔn)品Camphor

人原胚腎轉(zhuǎn)化細(xì)胞;293 Ad5暈苯(>95.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC)Coronene
大鼠間骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(RMSC-bm)(5×105)γ-L-Glutamyl-α-naphthylamideγ-L-谷酰-1-奈酰胺10克BR，98%

牛腎細(xì)胞;MDBK(BVDV-free)2-(5-溴-2-偶... 2-(5-Bromo-2-pyridylazo)-5-(diethylami... 14337-53-2 500MG 通用試劑

小鼠瘤株;S180 小鼠細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL明膠;柏明膠;動物膠;筋膠;銀明膠 Gqlctin;Purcgql 9000-70-8

人羊膜間充質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞 HumanPONCEAUSSTAIN麗春紅S (猩紅S)蛋白組學(xué)級紅色，無混濁液體RTsigma

TNFRSF25 Others Human 人 TNFRSF25 / DDR3 / APO3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 4111-54-0二異酰胺溶液(+4℃)litxium diisopropylamide
猞猁皮膚成纖維樣細(xì)胞 CCL7 Protein Human 重組人 MCP-3 / CCL7 蛋白 (His 標(biāo)簽)高粘度羥乙基纖維素HEC, hydroxyethyl cellulose質(zhì)量規(guī)格：38000~42000 mpa.s

SK-MES-1(人肺鱗癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 Alpha 1 Aiypsin / SerpinA1a 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) L-天冬氨酸鈉一水L-Aspartic acid  salt, monohydrate質(zhì)量規(guī)格：>99%，BR

人胚腎細(xì)胞;293 [HEK-293]屑(>99%，5N)Lead granules質(zhì)量規(guī)格：>99%，5N

FLT3 Others Mouse 小鼠 FLT-3 / CD135 / FLK-2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 粘蛋白Mucin from bovine submaxillary glands質(zhì)量規(guī)格：Type I-S; from bovine submaxillary glands

非洲綠猴腎細(xì)胞;CV-1N,N'-二琥珀基碳酸酯(>98%,EP)N,N'-Disuccinimidyl carbonate (DSC)質(zhì)量規(guī)格：>98%,EP
收到猞猁皮膚成纖維樣細(xì)胞 處理方法
產(chǎn)品僅用于科研1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸浮）、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時再進(jìn)行傳代操作。