慢性粒細(xì)胞細(xì)胞 冷凍保存細(xì)胞之方法：

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細(xì)胞凍存步驟：

資源名稱　慢性粒細(xì)胞細(xì)胞
種屬:K-562

形態(tài):成淋巴細(xì)胞

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:IMDM:Iscove＇sModiefiedDulbecco＇sMedium10%FBS

生長(zhǎng)特性:懸浮生長(zhǎng)
細(xì)胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對(duì)于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對(duì)細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲(chǔ)存的zui好方式，快遞時(shí)間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種：產(chǎn)品僅用于科研
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對(duì)細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞培養(yǎng)過程：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號(hào)16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
以下是慢性粒細(xì)胞細(xì)胞 的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
MDBK(牛腎細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2草酸鈷(>99%,BR)質(zhì)量規(guī)格：>99%,BRCobalt (II) oxalate

Promocell C-22170 Myocyte GrowthMedium KIT, 心肌細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基套裝 500ml刀豆素A(> 95%,BR)質(zhì)量規(guī)格：> 95%,BRConcanamycin A

kasumi-1, 人細(xì)胞株普伐他丁鈉（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品Pravastatin 

ART4 Others Mouse 小鼠 Art4 / CD297 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 普伐他丁鈉質(zhì)量規(guī)格：>98%Pravastatin 

大鼠內(nèi)臟脂肪細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL潑尼龍質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,USP/BPPrednisolone
CL-0206SGC7901(人細(xì)胞)5×106cells/瓶×2草酸銨(98~101%,BR)Ammonium oxalate hydrate質(zhì)量規(guī)格：98~101%,BR

MLF, 小鼠成纖維細(xì)胞5'-單1酸腺苷(>95%，BR)Adenosine-5'-monophosphate, free acid質(zhì)量規(guī)格：>95%，BR

Sars結(jié)構(gòu)蛋白表達(dá)株;293sars181A 人膀胱上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL硫酸鋁十六水(>Aluminum sulfate, hexadecahydrate質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

人急性早幼粒細(xì)胞;HL-60葡萄糖-6-1酸脫氫酶，硫酸銨懸浮液Glucose-6-phosphate dehydrogenase質(zhì)量規(guī)格：酶活>200 NADP units/mg，BC

PPP3R1 Others Human 人 PPP3R1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 蘋果酸脫氫酶(>12,000U/ml，BC)Malate dehydrogenase質(zhì)量規(guī)格：>12,000U/ml，BC
EFNB2 Others Canine 狗 Ephrin-B2 / EFNB2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) SaikosaponinC柴胡皂甙C10克BR，粘度500 mpe.s

人胎盤絨膜癌細(xì)胞;BeWoL-薄荷醇 L-Menthol,≥99% 2216-51-5 25G 通用試劑

HCC-9724細(xì)胞，人細(xì)胞 小鼠肥大細(xì)胞癌細(xì)胞,P815細(xì)胞 牛腎細(xì)胞;MDBKL-谷安醋-γ-芐酯 (+4`C) gcmmc-Bqnzyl L-glutcmctq 1676-73-9

MDCK(犬腎細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2硅酸鈣5克

Promocell C-23010 Fibroblast Growth Medium , 成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基(即用型) 500ml933-88-02-甲基本甲酰錄o-Toluoyl chloride
慢性粒細(xì)胞細(xì)胞 615小鼠瘤株;HP615骨抑制素，人Osteostatin (human)質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

TNFRSF10B Others Human 人 TNFRSF10B / AILR2 / CD262 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 骨抑制素（1-5）酰胺，人，牛，狗，大鼠，小鼠，兔，馬Osteostatin (1-5) amide(human, bovine, dog, horse,mouse, rabbit, rat)質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

人胚胎，皮膚，肌肉;M-20骨抑制素酰胺，人Osteostatin amide (human)質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

CNPY4 Others Human 人 CNPY4 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) p60 v-結(jié)構(gòu)域（137-157）p60 v-src (137-157)質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

SD大鼠骨髓間質(zhì)干細(xì)胞 SD rat bone marrow mesenchymal stem cellsp60 C-結(jié)構(gòu)域底物ⅠLys(生物素)p60c-src Substrate ILys(Biotin)質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR
收到慢性粒細(xì)胞細(xì)胞 處理方法
產(chǎn)品僅用于科研1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請(qǐng)拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸浮）、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長(zhǎng)密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無(wú)菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。