人外周淋巴細(xì)胞說明書冷凍保存細(xì)胞之方法：

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細(xì)胞凍存步驟：

資源名稱　人外周淋巴細(xì)胞說明書
種屬:U266B1

形態(tài):淋巴母細(xì)胞樣

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:RPMI1640(w/oHepes)10%FBS　

生長(zhǎng)特性:懸浮生長(zhǎng)
細(xì)胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對(duì)于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對(duì)細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲(chǔ)存的zui好方式，快遞時(shí)間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種：產(chǎn)品僅用于科研
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對(duì)細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞培養(yǎng)過程：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號(hào)16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
以下是人外周淋巴細(xì)胞說明書的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
hMo-PB-c single donorpre-screened 外周血來源的人類單核細(xì)胞，單一來源，預(yù)選型 10 million 人絨毛間充質(zhì)成纖維細(xì)胞HVMF化銫(用于高通量質(zhì)譜,99.9995%)質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品，用于高通量質(zhì)譜,99.9995%Cesium iodide

MDA-MB-231(ATCC來源), 人癌細(xì)胞1,3-二甲基-2-咪唑啉酮(用于GC-HS,≥99.8%(GC))質(zhì)量規(guī)格：用于GC-HS,≥99.8%(GC)1,3-Dimethyl-2-imidazolidinone

GPC3 Others Mouse 小鼠 Glypican 3 / GPC3 / OCI-5 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 甲地孕酮(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品Megestrol base

人正常上皮細(xì)胞;RWPE-13-縮酮質(zhì)量規(guī)格：>99%,BREstradiene dione-3-keta

狗腎細(xì)胞隆突型;MDCK superdome T細(xì)胞，CTLL-2細(xì)胞 RTE細(xì)胞，大鼠氣管上皮細(xì)胞索拉非尼質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)Sorafenib base
CL-0321BEL-7405(人細(xì)胞)5×106cells/瓶×2尿苷；尿嘧啶核苷質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR，可用于細(xì)胞培養(yǎng)Uridine

MANF Others Mouse 小鼠 MANF / ARMET 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 尿嘧啶核苷,尿苷(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品Uridine

小鼠肺大內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mLUTP;5‘-三1酸尿苷三鈉質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRUTP, Tri Salt

LLC1[LL/2]小鼠Lewis細(xì)胞 LLC1[LL/2] mice with Lewis lung cancer cells 1640+10% FBSFmoc-N'-甲基三苯甲基-L-賴氨酸質(zhì)量規(guī)格：0.98Fmoc-Lys(Mtt)-OH

IL1B Protein Human 重組人 IL-1 beta / IL1B 蛋白 (pro form, His 標(biāo)簽)芴甲氧羰基-O-芐基-L-蘇氨酸質(zhì)量規(guī)格：0.98Fmoc-Thr(Bzl)-OH
ITGA5&ITGB6 Others Human 人 ITGA5 & ITGB6 Heterodimer 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 2-溴蒽(>97.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(GC)2-Bromoanthracene

CL-0465WERI-Rb-1(人視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞)5×106cells/瓶×29,10-雙(二乙基膦甲基)蒽(>98.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)9,10-Bis(diethylphosphonomethyl)anthracene

BRL細(xì)胞，肝細(xì)胞 人細(xì)胞,9L-E細(xì)胞 人上皮細(xì)胞RNAHMEpiC miRNA5 μg9-溴蒽(>99.0%(GC)(HPLC))質(zhì)量規(guī)格：>99.0%(GC)(HPLC)9-Bromoanthracene

獼猴肌肉細(xì)胞;MMm72-溴-9,10-二苯基蒽(>95.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC)2-Bromo-9,10-diphenylanthracene

ENG Others Human 人 Endoglin / CD105 / ENG 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 1-溴-4-正辛基苯(>99.0%(GC)(T))質(zhì)量規(guī)格：>99.0%(GC)(T)trans-4-Butylcyclohexanecarboxylic Acid
人外周淋巴細(xì)胞說明書人臍內(nèi)皮細(xì)胞(HVVEC)( 5×105 ) SK-MEL-1, 人皮膚色素瘤細(xì)胞 Human核黃素1酸鈉混合物（標(biāo)準(zhǔn)品）Riboflavin-5-phosphate 質(zhì)量規(guī)格：供HPLC法系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

人胚胎心肌組織來源細(xì)胞;CCC-HEH-2麥芽糖（標(biāo)準(zhǔn)品）D-(+)-Maltose monohydrate 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

IL17A Others Human 人 IL17 / IL17A 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 尿素（標(biāo)準(zhǔn)品）Urea質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定

CL-0285L-O2(人正常肝細(xì)胞)5×106cells/瓶×2生物素（標(biāo)準(zhǔn)品）D-Biotin質(zhì)量規(guī)格：HPLC法含量測(cè)定

hDPSCs, 人前牙髓干細(xì)胞 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞，3T6swiss細(xì)胞 Hs 1.Tes(正常人細(xì)胞)特非那定（標(biāo)準(zhǔn)品）Terfenadine質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定
收到人外周淋巴細(xì)胞說明書處理方法
產(chǎn)品僅用于科研1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請(qǐng)拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。⒓?xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長(zhǎng)密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。