大鼠海綿體內(nèi)皮細胞培養(yǎng)冷凍保存細胞之方法：

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細胞凍存步驟：

資源名稱　大鼠海綿體內(nèi)皮細胞培養(yǎng)
分離基物海綿體組織

提供形式:5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

安全等級:1

模式菌株:未知

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:M199、FBS、內(nèi)皮細胞生長添加劑、Heparin、Ascorbic Acid、Hydrocortisone、Penicillin、Streptomycin 我們推薦使用大鼠海綿體內(nèi)皮細胞專用完全培養(yǎng)基作為體外培養(yǎng)大鼠海綿體內(nèi)皮細胞的培養(yǎng)基。
細胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大，一旦細胞狀態(tài)不好，很難說是細胞自身不行，還是復蘇沒操作好；另外溫度對細胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細胞儲存的zui好方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質量；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種：產(chǎn)品僅用于科研
是我們復蘇好細胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶，排除復蘇造成影響，常溫運輸也對細胞影響也不大，只需加25元運費(順豐)。
質量保證：我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。
細胞培養(yǎng)過程：

細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。
以下是大鼠海綿體內(nèi)皮細胞培養(yǎng)的相關熱銷產(chǎn)品：
非洲綠猴腎細胞系/HCV-NS3;Vero-HCV-NS3溴酚藍質量規(guī)格：INDBromophenol blue

FCGR2 Others Mouse 小鼠 CD32 / FCGR2B 人細胞裂解液 (陽性對照) 固藍B質量規(guī)格：BSFast Blue B Salt

細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)脫落酸,S-誘抗素; 壯芽靈質量規(guī)格：95%,BRAbscisic acid,S-ABA

RBBP4 Others Human 人 RBBP4 / RBAP48 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 胃蛋白酶(1:3000)質量規(guī)格：1:3000,BRPEPSIN

人細胞;SF767核糖核酸酶A(sigma)質量規(guī)格：≥50 U/mg,sigma 原裝Ribonuclease A from bovine pancreas
EPHA4 Others Human 人 EPHA4 人細胞裂解液 (陽性對照) 阿斯巴甜質量規(guī)格：>98%,BRAspartame

Hacat 人永生化角質細胞克拉維酸鉀質量規(guī)格：標準品Potassium clavulanate

CM-R115大鼠小梁網(wǎng)細胞完全培養(yǎng)基100mL刺槐素質量規(guī)格：>98%，標準品ROBININ

MDA-MB-231(ATCC來源), 人癌細胞質量規(guī)格：>98.0%，進口Amfebutamone

EB病毒轉化的人B細胞;KMY0920 人皮膚肥大細胞完全培養(yǎng)基 100mL維生素B2（標準品）質量規(guī)格：HPLC≥99%，標準品vitamin B2
HOS細胞，人細胞 皺褶青霉 人胚肺細胞系;KuMA氧化亞銅500克

TE-10(人細胞) 5×106cells/瓶×2BOC-Nim-芐基-L-組... BOC-Nim-benzyl-L-Histidine,≥98.0% 20898-44-6 1G 通用試劑

HMy2.CIR(人B母細胞) 5×106cells/瓶×2 mOPC, 小鼠少突膠質前體細胞 人皮膚成纖維細胞;HSAS4異丁安;1-安基;2-基炳安 IsobutylcMinq;1-cMinoisobutcnq;2-Mqthyl propylcMinq 78-81-9

人膀胱上皮永生化細胞;SV-HUC-11,3-二溴本5克RT，避光

CSF1R Others Rat 大鼠 CSF1R / MCSF Receptor / CD115 人細胞裂解液 (陽性對照) 141-32-2酸丁酯n-Butyl acrylate;2-Propenoic acid butyl ester
大鼠海綿體內(nèi)皮細胞培養(yǎng)HuH-7人細胞 Human苦蘇花皂苷CCussosaponin C質量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

CLU Others Mouse 小鼠 CLU / Clusterin 人細胞裂解液 (陽性對照) 常春藤苷CHederacoside C質量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

人腎近曲小管上皮細胞RNAHRPTEpiC miRNA5 μgHederacolchiside EHederacolchiside E質量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

LTF Others Human 人 LTF / Lactoferrin / Lactoansferrin 人細胞裂解液 (陽性對照) 3-O-β-D-葡萄糖( 1→3)- a -L-鼠李糖(1→2)- a-L-阿拉伯糖 齊墩果酸– 28-O-鼠李糖(1→4)葡萄糖(1→6)葡萄糖苷V質量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

Panc10.05 *腺癌3-O-b-D-葡萄糖( 1→4)-[ a -L-鼠李糖(1→2)]- a-L-阿拉伯糖 23-羥基羽扇豆20(29)-1-28–酸- 28-O-鼠李糖(1→4)葡萄糖(1→6)葡萄糖苷V質量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品
收到大鼠海綿體內(nèi)皮細胞培養(yǎng)處理方法
產(chǎn)品僅用于科研1、首先，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細胞形態(tài)、所用基礎培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)）；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。