細(xì)胞培養(yǎng)過程：

產(chǎn)品僅用于科研冷凍保存細(xì)胞之方法：
牛胚氣管細(xì)胞形態(tài)冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

資源名稱　牛胚氣管細(xì)胞形態(tài)
種屬:EBTr (NBL-4)

類型:貼壁生長

形態(tài):CM2-1培養(yǎng)液中，貼壁，上皮細(xì)胞樣，梭形、圓形

提供形式:復(fù)蘇形式：T25培養(yǎng)瓶1瓶；或者凍存形式：2ml凍存管2支，干冰費(fèi)另計(jì)。

安全等級:2

模式菌株:未知

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:90%RPMI-1640+10%FBS

傳代方法:將舊培養(yǎng)液吸除，PBS清洗兩遍后，加入6mL（/100mm皿）胰酶，在顯微鏡下觀察，期間禁止搖晃培養(yǎng)皿，細(xì)胞剛有脫落時(shí)，則吸除大部分胰酶，留約0.5mL，移至培養(yǎng)箱消化，約5min取出。傳代用12mL CM2-1培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打均勻細(xì)胞，后可分3~6皿培養(yǎng)；

生長條件:37℃，5%CO2，CM2-1培養(yǎng)液。CM2-1培養(yǎng)液：90%RPMI-1640+10%FBS。RPMI-1640：1640培養(yǎng)基，含谷氨酰胺。

存儲條件:凍存則用6mL凍存液（90%FBS+10%DMSO）終止消化，吹打均勻，分為6支凍存管，用程序降溫盒于-80℃凍存，過夜轉(zhuǎn)移至液氮中保存。

細(xì)胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲存的zui好方式，快遞時(shí)間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞凍存步驟：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
產(chǎn)品僅用于科研一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

收到牛胚氣管細(xì)胞形態(tài)處理方法
1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。
以下是牛胚氣管細(xì)胞形態(tài)的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
ENPP2 Others Human 人 Autotaxin / ENPP2 / NPP2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 活性炭(植物細(xì)胞培養(yǎng)級)質(zhì)量規(guī)格：植物細(xì)胞培養(yǎng)級Activated charcoal

大鼠嗅鞘細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL10X分子篩(干燥劑用)質(zhì)量規(guī)格：干燥劑用

DH82狗腎惡性癥細(xì)胞 DH82 dog kidney maligna histiocytosis cells MEM培養(yǎng)基(GIBCO)+10%FBS1酸三苯酯(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.8%(GC)Triphenyl phosphate

IFNA5 Protein Human 重組人 IFNA5 / IFNaG / Ierferon alpha-G 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)二十三烷(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5% (GC)Tricosane

NCI-H2227(人小細(xì)胞細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 FRhK-4(恒河猴胚腎細(xì)胞)十一烷(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.8%(GC)Undecane
CM-H045人肝動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL氯法齊明（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：供TCL鑒別用Clofazimine

TSPAN31 Others Human 人 TSPAN31 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 頭孢呋辛酯質(zhì)量規(guī)格：745~875μg/mg,USPCefuroxime axetil

人少突膠質(zhì)前體細(xì)胞-貼壁生長HOPC達(dá)比加群質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRDabigatran

CCC-ESF-1細(xì)胞，人胚胎皮膚成纖維細(xì)胞 人癌細(xì)胞,MDA-MB-415細(xì)胞 口腔角質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基OKM瑞格列奈質(zhì)量規(guī)格：>99%,BRRepaglinide

瘤牛皮膚細(xì)胞;BIN-S1瑞格列奈（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：>99%,BRRepaglinide
PRKAR1A Others Human 人 PRKAR1A / PRKAR1 / PKR1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 匹多莫德質(zhì)量規(guī)格：>99%,BRPidotimod

小耳豬肺細(xì)胞;SEP-L1匹多莫德（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：含量測定Pidotimod

A-427細(xì)胞，人細(xì)胞 小鼠成纖維細(xì)胞,L929細(xì)胞 CM-R103大鼠腦平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL硫酸羥基氯喹質(zhì)量規(guī)格：>98%Hydroxychloroquine Sulfate

RM-1(小鼠細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2乙酰唑胺質(zhì)量規(guī)格：>99%Acetazolamide

Gibco 10486025 EXPRESS FIVE SFM..昆蟲培養(yǎng)基 1000mlBMS-345541質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRBMS345541
牛胚氣管細(xì)胞形態(tài)DDC Others Mouse 小鼠 DOPA Decarboxylase / DDC 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 黃楊堿/環(huán)維黃楊星D（標(biāo)準(zhǔn)品）Cyclovirobuxine質(zhì)量規(guī)格：滴定法≥99%，標(biāo)準(zhǔn)品

豹貓皮膚成纖維樣細(xì)胞;LCS5灰氈毛忍冬皂苷乙（標(biāo)準(zhǔn)品）Macranthoidin B質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

GBC-SD細(xì)胞，細(xì)胞 人二倍體細(xì)胞系,WI-38細(xì)胞 小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞;BV2茴芹內(nèi)酯Pimpinellin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

小鼠細(xì)胞;P3/NSI/1-Ag4-1積雪草苷（標(biāo)準(zhǔn)品）Asiaticoside質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

AMICA1 Others Human 人 JAML / AMICA 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 吉馬酮（標(biāo)準(zhǔn)品）Germacrone質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥99%，標(biāo)準(zhǔn)品