發(fā)綠色熒光的小鼠胚胎干細胞培養(yǎng)冷凍保存細胞之方法：

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細胞凍存步驟：

資源名稱　發(fā)綠色熒光的小鼠胚胎干細胞培養(yǎng)
種屬:G1

形態(tài):上皮細胞樣

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

生長特性:貼壁生長
細胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復(fù)蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大，一旦細胞狀態(tài)不好，很難說是細胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對細胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細胞儲存的zui好方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種：產(chǎn)品僅用于科研
是我們復(fù)蘇好細胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運輸也對細胞影響也不大，只需加25元運費(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。
細胞培養(yǎng)過程：

細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?/span>10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。
以下是發(fā)綠色熒光的小鼠胚胎干細胞培養(yǎng)的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
THPO Protein Mouse 重組小鼠 Thrombopoietin / THPO / TPO 蛋白 (His 標(biāo)簽)CHAPSO；3-[(3-膽氨丙基)二甲基氨基]-2-羥基-1-丙磺酸質(zhì)量規(guī)格：>99%,分子生物學(xué)級；CHAPSO

人張氏肝細胞;Chang liver 人上皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL二硫赤蘚醇(DTE)；1,4-二硫代赤蘚醇質(zhì)量規(guī)格：>99%,進分sigma1,4-Dithioerythritol

Saos-2，人成細胞精噁唑禾草靈(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品Fenoxaprop-P

ART4 Others Cynomolgus 食蟹猴 ART4 人細胞裂解液 (陽性對照) 6-羥基煙酸(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98.0%(HPLC))質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98.0%(HPLC)6-Hydroxynicotinic Acid

人胚;MRC-5正庚醇(分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.8%（GC))質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.8%（GC)1-Heptanol
CM-H076人心房肌細胞完全培養(yǎng)基100mL4-甲基傘形酮酰-alpha-D-吡喃糖苷質(zhì)量規(guī)格：分子生物學(xué)級MU-alpha-GAL

OSM Others Mouse 小鼠 Oncostatin M / OSM 人細胞裂解液 (陽性對照) 粘酸(>98%，BC)質(zhì)量規(guī)格：>98%，BCMucic acid

小鼠角膜內(nèi)皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL碲標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml，基體:HCI)質(zhì)量規(guī)格：100μg/ml，基體:HCITellurium standard

NCI-H929-UBC-EGFP(穩(wěn)定株)人細胞 NCI-H929-UBC-EGFP (stable sain) human myeloma cell 1640+20% FBS(熱滅活)銩標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/mL,基體：10%HCL)質(zhì)量規(guī)格：1000μg/mL,基體：10%HCLThulium standard

IL25 Protein Human 重組人 IL25 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)釩標(biāo)準(zhǔn)溶液(500mg/L,溶劑：水)質(zhì)量規(guī)格：500mg/L,溶劑：水Vanadium standard
LRIG1 Others Mouse 小鼠 LRIG1 / LIG-1 人細胞裂解液 (陽性對照) L-鼠李糖；鼠李糖一水質(zhì)量規(guī)格：≥98%，BRL(+)-Rhamnose monohydrate

MOLT-4 人急性母細胞細胞鼠尾草酚(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥95%，標(biāo)準(zhǔn)品Carnosol

NCI-H1975人 Human lung adenocarcinoma cell line NCI-H1975 RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS鼠尾草酸（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Carnosic acid

ADIPOQ Protein Mouse 重組小鼠 Adiponectin / Acrp30 / ADIPOQ 蛋白 (His 標(biāo)簽)雙去氧基姜黃素(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Bisdemethoxycurcumin

SV-40轉(zhuǎn)化;WI38/VA13 人胰島β細胞完全培養(yǎng)基 100mLL-犬尿氨酸(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品L-Kynurenine
發(fā)綠色熒光的小鼠胚胎干細胞培養(yǎng)人間充質(zhì)干細胞-臍帶磺胺-5-甲氧嘧啶(98%)Sulfameter質(zhì)量規(guī)格：>98%

人胚胎，皮膚，肌肉;M-20 人外周血白細胞完全培養(yǎng)基 100mL雙甲脒（標(biāo)準(zhǔn)品）Amitraz質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,分析標(biāo)準(zhǔn)品

人臍動脈平滑肌細胞HUASMC雙甲脒Amitraz質(zhì)量規(guī)格：>97%,BR

EPCAM Others Rat 大鼠 EpCAM / OP-1 / TACSTD1 人細胞裂解液 (陽性對照) 檸檬酸一水Citric acid monohydrate質(zhì)量規(guī)格：>99%,AR

大鼠食管上皮細胞完全培養(yǎng)基 100mLSalubrinalSalubrinal質(zhì)量規(guī)格：>98%,eIF2α選擇性抑制劑
收到發(fā)綠色熒光的小鼠胚胎干細胞培養(yǎng)處理方法
產(chǎn)品僅用于科研1、首先，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。