HBL-1細(xì)胞完全培養(yǎng)基說明書冷凍保存細(xì)胞之方法：

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細(xì)胞凍存步驟：

資源名稱　HBL-1細(xì)胞完全培養(yǎng)基說明書
安全等級:1

模式菌株:未知

培養(yǎng)方法

生長條件:90%RPMI-1640+10%FBS
細(xì)胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲存的zui好方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種：產(chǎn)品僅用于科研
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞培養(yǎng)過程：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
以下是HBL-1細(xì)胞完全培養(yǎng)基說明書的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
CD8A Others Rat 大鼠 CD8A / Lyt2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 草酸亞鐵二水(>99%,BR)質(zhì)量規(guī)格：>99%,BRIron (II) oxalate, dihydrate

腸動脈內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)氯化(>99%,BR)質(zhì)量規(guī)格：>99%,BRLead (II) chloride

Hep G2細(xì)胞，細(xì)胞 人細(xì)胞(HPV-18永生化細(xì)胞),HeLa229細(xì)胞 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞cDNAHUMSC cDNA碳酸鋇(>99%,BR)質(zhì)量規(guī)格：>99%,BRBarium carbonate

羅猴胎腎細(xì)胞;MA104苯甲酰胺(>質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRBenzamide

CSF3 Others Human 人 G-CSF / GCSF 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 比布里希猩紅(>90%,BS)質(zhì)量規(guī)格：>90%,BSBiebrich scarlet
CXCL5 Protein Human 重組人 CXCL5 蛋白3，5-二氨基-6-氯吡嗪-2-羧酸甲酯（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：檢查Methyl 3,5-diamino-6-chloropyrazine-2-carboxylate

NRK(大鼠腎細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 人 PRAP1 / Proline-rich acidic 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 苯噻啶（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：檢查Pizotifen

615小鼠株;Ca763β-環(huán)糊精（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：含量測定β-Cyclodextrin

PROCR Others Mouse 小鼠 Epcr / PROCR 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 卡托普利二硫化物（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：檢查Captopril Disulfide

Calu-1 人細(xì)胞鹽酸阿利克侖質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口Aliskiren
人胚腎細(xì)胞;293 [HEK-293]TRYPSININHIBITOR,SOYBEAN胰蛋白酶抑制劑,大豆試劑級

TLR4 Others Human 人 TLR4 / CD284 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 流醋鉍 BisMuth sulfctq;BisMuthous sulfctq 7787-68-0

CL-0331CTLL-2(小鼠T細(xì)胞)5×106cells/瓶×2Acriflavine黃素100毫克AR，99%

BRL 3A, 大鼠肝正常細(xì)胞 人小細(xì)胞，NCI-H209細(xì)胞 HIT-T15(倉鼠beta胰島細(xì)胞)DANSYLCHLORIDE丹磺酰錄蛋白組學(xué)級10G605-65-2Frozen

人導(dǎo)管癌細(xì)胞;HCC38Palmiticacid 10g原裝/25g原裝 Sigma P0500
HBL-1細(xì)胞完全培養(yǎng)基說明書人肝間充質(zhì)干細(xì)胞(肝)(HMSC-HE)(5×105)井岡霉素Validamycin質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

CM-R016大鼠*星狀細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL腐草霉素Phleomycin質(zhì)量規(guī)格：≥97%,進(jìn)分

綠色熒光蛋白標(biāo)記小鼠前細(xì)胞;MFC-GFP 小鼠小腸隱窩上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL寡霉素Oligomycin, from Streptomyces質(zhì)量規(guī)格：>92%,進(jìn)分

mEPC, 小鼠內(nèi)皮祖細(xì)胞-骨髓 Mouse紡錘菌素Netropsin di質(zhì)量規(guī)格：≥98%,進(jìn)分

P4HB Others Mouse 小鼠 P4HB / ERBA2L 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 頭孢菌素C鋅鹽Cephalosporin C  salt質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口
收到HBL-1細(xì)胞完全培養(yǎng)基說明書處理方法
產(chǎn)品僅用于科研1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸浮）、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時再進(jìn)行傳代操作。