細胞培養(yǎng)過程：

產(chǎn)品僅用于科研冷凍保存細胞之方法：
人表柔比星耐藥細胞株說明書冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

資源名稱　人表柔比星耐藥細胞株說明書
種屬:MDA-MB-231/EP1

形態(tài):上皮樣

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle＇sBalancedSalts)10%FBS

生長特性:貼壁生長

細胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大，一旦細胞狀態(tài)不好，很難說是細胞自身不行，還是復蘇沒操作好；另外溫度對細胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細胞儲存的zui好方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種：
是我們復蘇好細胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶，排除復蘇造成影響，常溫運輸也對細胞影響也不大，只需加25元運費(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。
細胞凍存步驟：

細胞培養(yǎng)步驟：
產(chǎn)品僅用于科研一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?/span>10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。

收到人表柔比星耐藥細胞株說明書處理方法
1、首先，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸浮）、細胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。
以下是人表柔比星耐藥細胞株說明書的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
CV-1 [Part of the Wistar Special Collection]非洲綠猴腎細胞 CV-1 [Part of the Wistar Special Collection] in African green monkey kidney cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS醋酸阿拉瑞林/丙氨瑞林 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRAlarelin Acetate

IFNB1 Protein Human 重組人 Ierferon beta / IFN-beta / IFNB 蛋白阿侖1酸鈉質(zhì)量規(guī)格：>99%,USPAlendronate

KiMA(人胚腎上皮細胞系) 5×106cells/瓶×2 艱難梭菌Closidium difficile細胞弛素E(>質(zhì)量規(guī)格：>98%，BRCytochalasin E

腸動脈內(nèi)皮細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)D-樟腦酸(>99%,BR)質(zhì)量規(guī)格：>99%,BRD-(+)-Camphoric acid

SERPINB2 Others Human 人 SerpinB2 / PAI-2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) D(+)-二苯甲酰1酸一水(>質(zhì)量規(guī)格：>98%，BRD-(+)DBTA, Dibenzoyl-D-tartaric acid, monohydrate
FaDu(人咽鱗癌細胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0299NCI-H460(人細胞)5×106cells/瓶×2 兔晶體上皮細胞永生系;N/N1003A(RLE)神經(jīng)肽W-30，人質(zhì)量規(guī)格：>95%,BRNeuropeptide W-30 (human)

正常大鼠腎細胞;NRK-52E神經(jīng)肽W-30，大鼠質(zhì)量規(guī)格：>95%,BRNeuropeptide W-30 (rat)

CN3 Others Rat 大鼠 Coactin 3 / CN3 人細胞裂解液 (陽性對照) 神經(jīng)降壓素（1-8）質(zhì)量規(guī)格：>95%,BRNeurotensin (1-8)

人成纖維細胞完全培養(yǎng)基 100mL神經(jīng)肽Y（13-36），豬質(zhì)量規(guī)格：>95%,BRNeuropeptide Y (13-36)(porcine)

T6細胞，人舌癌細胞 甲型副傷寒沙門氏菌 大鼠肝細胞瘤;H-4-II-E芍藥內(nèi)酯苷(標準品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥96.50%，標準品Alibiflorin
小鼠背部脊髓神經(jīng)元(MN-dsc)(1×106)考馬斯亮藍G250shēng huà shì jì容量：2～8°C1克

倉鼠腎細胞;HL-12,4,5-三氧基本全;細忻全 2,4,5-TriMqthoxybqnzcldqhydq;cscrylcldqhydq;2,4,5-Trixy7noxybqnzcldqhydq triMqthyl qtqr 4460-86-0

小鼠樹突狀細胞低轉(zhuǎn)移細胞(綠色熒光蛋白標記);DG6-GFP 小鼠內(nèi)臟脂肪細胞完全培養(yǎng)基 100mL無水鈣shēng huà shì jì容量：5克

HET-1A, 人食管上皮細胞 HumanCALCIUMCHLORIDE,1MSTERILE錄化鈣無菌溶液,1M生物技術(shù)級100MLRT

CD209B Others Mouse 小鼠 CD209B / DC-SIGNR1 人細胞裂解液 (陽性對照) 97-67-6L-蘋果酸L(-)-Malic acid
人表柔比星耐藥細胞株說明書小鼠樹突狀細胞低轉(zhuǎn)移細胞(VAP33-GFP融合蛋白穩(wěn)定過表達);DG6-VAP33-GFP 小鼠表皮色素細胞完全培養(yǎng)基 100mL拉西地平（標準品）Lacidipine質(zhì)量規(guī)格：含量測定

RGC-5, 小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞 Mouse拉西地平Lacidipine質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

LRPAP1 Others Mouse 小鼠 LRPAP1 / RAP 人細胞裂解液 (陽性對照) 尼林（標準品）Nicergoline質(zhì)量規(guī)格：含量測定

人腎上皮細胞裂解物HREpiCL鹽酸賽洛唑啉（標準品）Xylometazoline 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標準品

LAMP3 Others Cynomolgus 食蟹猴 LAMP3 / DC-LAMP 人細胞裂解液 (陽性對照) 鹽酸賽洛唑啉Xylometazoline 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR