人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞長春新堿耐藥株說明書冷凍保存細(xì)胞之方法：

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細(xì)胞凍存步驟：

資源名稱　人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞長春新堿耐藥株說明書
種屬:HCT-8/V

形態(tài):上皮樣；多角形

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:RPMI1640(w/oHepes)10%FBS+2000ng/ml長春新堿

生長特性:貼壁生長
細(xì)胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復(fù)蘇手法對于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲存的zui好方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種：產(chǎn)品僅用于科研
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運輸也對細(xì)胞影響也不大，只需加25元運費(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞培養(yǎng)過程：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
以下是人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞長春新堿耐藥株說明書的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
PVRL1 Others Human 人 PVRL1 / HVEC / CD111 / Nectin-1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 吉莫斯特;吉美嘧啶(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：>99%,標(biāo)準(zhǔn)品Gimeracil

成骨細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)吉莫斯特;吉美嘧啶質(zhì)量規(guī)格：>98%,二氫嘧啶脫氫酶(DPD)抑制劑Gimeracil

CD300LG Others Human 人 CLM-9 / EM4 / CD300LG 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 小白菊內(nèi)酯質(zhì)量規(guī)格：0.8%內(nèi)酯含量,BRParthenolide

人急性單核細(xì)胞細(xì)胞;THP-1小白菊內(nèi)酯質(zhì)量規(guī)格：>98%標(biāo)準(zhǔn)品Parthenolide

FIP293細(xì)胞，人胚腎細(xì)胞(亞系*) 貓腎細(xì)胞,F81細(xì)胞 CL-0276H-97(人高轉(zhuǎn)移細(xì)胞)5×106cells/瓶×2利扎曲坦質(zhì)量規(guī)格：>98%Rizatriptan
FAS Others Mouse 小鼠 FAS / TNFRSF6 / CD95 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 伊曲康唑質(zhì)量規(guī)格：>99%,EP6,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)Itraconazole

CM-H133人視網(wǎng)膜muller細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL伊曲康唑（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品Itraconazole

ANGPTL7 Others Canine 狗 ANGPTL7 / Angiopoietin-like 7 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 反油酸（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.0% (GC)Elaidic acid

人肝細(xì)胞HH十七碳酸（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品Heptadecanoic acid

THLE-3細(xì)胞，人肝上皮細(xì)胞 人癌細(xì)胞,MCF-7(OLD)細(xì)胞 大鼠心肌細(xì)胞RCM十七碳酸（98%）質(zhì)量規(guī)格：0.98Heptadecanoic acid
神經(jīng)前體細(xì)胞分化培養(yǎng)基NPCML-甘-異白二肽,甘氨酰-L-異亮氨酸質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRBenzyl bromide

EPHB1 Others Mouse 小鼠 EphB1 / EPHT2 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) PR171關(guān)鍵中間體II質(zhì)量規(guī)格：>97%PR171 intermedaite II

人胚;HFL-IPR171關(guān)鍵中間體III質(zhì)量規(guī)格：>97%(alphaS)-alpha-[(4-Morpholinylacetyl)amino]benzenebutanoyl-L-leucyl-L-phenylalanine

F81細(xì)胞，貓腎細(xì)胞 人細(xì)胞,LS174T細(xì)胞 CM-H085人臍動脈平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mLPR171關(guān)鍵中間體IV質(zhì)量規(guī)格：>97%Boc-HPh-Leu-Phe-Ome

正常大鼠腎細(xì)胞(EGF受體陽性);NRK49FPneumadin，大鼠質(zhì)量規(guī)格：>95%,BRPneumadin (rat)
人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞長春新堿耐藥株說明書EFNB1 Others Human 人 EphrinB1 / EFNB1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 雷公藤內(nèi)酯甲（標(biāo)準(zhǔn)品）Wilforlide A質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

人腎系膜細(xì)胞HRMC連翹酯苷E(標(biāo)準(zhǔn)品)Forsythoside E質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

IFNG Others Ferret 雪貂 IFNG / Ierferon Gamma 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 羅通定/左旋延胡索乙素/左旋四氫巴馬汀(標(biāo)準(zhǔn)品）Rotundine/ L-Tetrahydropalmatine質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

牛腎細(xì)胞;MDBK表沒食子兒茶素沒食子酸酯（標(biāo)準(zhǔn)品）EGCG, (-)-Epigallocatechin gallate/Green Tea Extract質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥99%，標(biāo)準(zhǔn)品

NCI-H23細(xì)胞，人非小細(xì)胞細(xì)胞 小鼠成纖維細(xì)胞,3T3NIH細(xì)胞 CM-R087大鼠軟骨細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL去氧膽酸（標(biāo)準(zhǔn)品）Deoxycholic acid質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品
收到人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞長春新堿耐藥株說明書處理方法
產(chǎn)品僅用于科研1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時再進(jìn)行傳代操作。