人細胞說明書冷凍保存細胞之方法：

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細胞凍存步驟：

資源名稱　人細胞說明書
種屬：GBC-SD

類型：貼壁生長

形態(tài)：上皮細胞樣

分離基物：

安全等級：1

模式：菌株未知

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基：RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S

生長條件：氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃
細胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復(fù)蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大，一旦細胞狀態(tài)不好，很難說是細胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對細胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細胞儲存的zui好方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種：產(chǎn)品僅用于科研
是我們復(fù)蘇好細胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運輸也對細胞影響也不大，只需加25元運費(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。
細胞培養(yǎng)過程：

細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?/span>10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。
以下是人細胞說明書的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
CLEC7A Others Mouse 小鼠 CLEC7A / Dectin-1 / CLECSF12 人細胞裂解液 (陽性對照) 奧硝唑（標準品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標準品Ornidazole

大耳山羊皮膚細胞;LDG-3奧沙利鉑質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR，細胞培養(yǎng)級Oxaliplatin

11. 細胞系統(tǒng)鹽酸氨基葡萄糖(標準品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標準品D-Glucosamine

CL-0139Li-7(人細胞)5×106cells/瓶×2氟派利多,氟哌利多質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRDroperidol

人小細胞;NCI-H2227 大鼠視網(wǎng)膜色素上皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL氟派利多,氟哌利多（標準品）質(zhì)量規(guī)格：含量測定Droperidol
H-4-IL-E 大鼠肝細胞瘤細胞 H-4-IL-E hepatoma cells of rats MEM90%(內(nèi)2mM Glutamin)+10%胎牛血清，補加非必須氨基酸(100x)單硝酸異山梨酯質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRIsosorbide 5-mononitrate

EGF Protein Mouse 重組小鼠 EGF / Epidermal Growth Factor 蛋白2-單硝酸異山梨酯（標準品）質(zhì)量規(guī)格：檢查用Isosorbide 2-nitrate

MuM-2B(人眼脈絡(luò)色素瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 臍內(nèi)皮細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)依那普利雙酮（標準品）質(zhì)量規(guī)格：檢查用XX

小耳豬腎細胞;SEPfk依那普利拉（標準品）質(zhì)量規(guī)格：檢查用Enalaprilat

ACVR1 Others Rat 大鼠 ALK-2 / ACVR1 / ALK2 人細胞裂解液 (陽性對照) 單1酸阿糖腺苷;阿糖腺苷單1酸質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRARA-AMP;Vidarabine monophosphate
COLO 205(人細胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0158MGC80-3(人細胞)5×106cells/瓶×2 大鼠肝細胞;BRL四乙酰核糖500克

人APP-PS1雙基因轉(zhuǎn)染CHO細胞株;7WPS1茜速皇R;隊肖基本偶氮水楊醋或內(nèi)鹽 clizcrin yqllow R;clizcrin yqllow RW;clizcrin orcngq;2-xy7noxy-5-[(4-nitnophqnyl)czo]bqnzoic ccid;5-(p-nitnophqnylczo)sclicylic ccid;C.I.Mordcnt orcngq 1、C.I. 14030; 1718-34-9

TNFRSF9 Others Mouse 小鼠 4-1BB / TNFRSF9 / CD137 人細胞裂解液 (陽性對照) 環(huán)孢菌速分離度用混合物;環(huán)孢速分離度用混合物 Cyclosporinq Rqsolution Mixturq 29862-13-3

KP-N-NS 人腎上腺神經(jīng)母細胞瘤()銀25克

SiHa人子宮頸鱗癌細胞 SiHa human uterine cervical squamous cell carcinoma MEM培養(yǎng)基(GIBCO)+10%FBS(IV型膠原酶)
人細胞說明書人類成纖維細胞系;CNLMG-B5538SKIN 人肝星形細胞完全培養(yǎng)基 100mL鄰羥基苯乙酮(>99%,BR)2-Hydroxyacetophenone質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

人視網(wǎng)膜色素上皮細胞RNAHRPEpiC miRNA5 μg2-異丙基咪唑(>2-Isopropylimidazole質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

IL2RG Others Human 人 IL2RG / CD132 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 2-萘乙酸(植物激素級)2-NAA, 2-Naphthaleneacetic acid質(zhì)量規(guī)格：>98%,植物激素級

大額牛與婆羅門牛雜交F1代皮膚成纖維樣細胞;BOS-52-萘(>2-Naphthaldehyde質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

A-375[A375]細胞，惡性色素瘤細胞 細胞,Jurk. Clone E6-1細胞 人皮膚鱗癌細胞;A-431 [A431]乙酸-2-萘酯(>2-Naphthyl acetate質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR
收到人細胞說明書處理方法
產(chǎn)品僅用于科研1、首先，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸浮）、細胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。