KYSE140 人食管鱗癌細(xì)胞培養(yǎng)冷凍保存細(xì)胞之方法：

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細(xì)胞凍存步驟：

資源名稱　KYSE140 人食管鱗癌細(xì)胞培養(yǎng)
類型：貼壁

分離基物：食管鱗癌細(xì)胞；男性

模式：菌株未知

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基：55

生長(zhǎng)條件：Temperature: 37.0°C Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%

存儲(chǔ)條件：92%完全培養(yǎng)基：+8%DMS
細(xì)胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對(duì)于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對(duì)細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲(chǔ)存的zui好方式，快遞時(shí)間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種：產(chǎn)品僅用于科研
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對(duì)細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞培養(yǎng)過程：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號(hào)16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
以下是KYSE140 人食管鱗癌細(xì)胞培養(yǎng)的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
大鼠肝細(xì)胞瘤;H-4-II-E蘆薈苷B(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品Aloin B

心室成纖維細(xì)胞 (HCFav)( 5×105 )牛蒡子苷元-4'-O-β-龍膽二糖苷(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品Arctigenin 4'-O-β-gentiobioside

T-102A胰蛋白酶-EDTA(含10mL 酶解緩沖液)1mL鹽酸莫西沙星質(zhì)量規(guī)格：>99%,BRMoxifloxacin

小鼠瘤細(xì)胞(NK靶細(xì)胞);YAC-1 小鼠肺大動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL鹽酸莫西沙星（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品Moxifloxacin

細(xì)胞名稱 種屬昔美酸沙美特羅質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRSalmeterol xinafoate
HCASMC Pellet 人平滑肌細(xì)胞團(tuán)塊 > 1 mio.cells 人*成纖維細(xì)胞-心室裂解物HCF-av L阿利克侖半富馬酸鹽質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRAliskiren hemifumarate

CL-0146LTEP-a-2(人)5×106cells/瓶×2埃博霉素 D質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)Epothilone D

IL27 Others Human 人 IL27 / Ierleukin-27 CHO細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 左亞葉酸鈣；甲酰四氫葉酸鈣質(zhì)量規(guī)格：>99%,BRCalcium levofolinate

人尿道上皮細(xì)胞裂解物HUCL阿法替尼雙馬來酸鹽質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)Afatinib dimaleate /BIBW2992-MA2

長(zhǎng)白山豬胚胎皮膚成纖維樣細(xì)胞;201184 *癌細(xì)胞，CFPAC-1細(xì)胞 Ranca細(xì)胞，小鼠細(xì)胞19-去甲-4-雄1二酮質(zhì)量規(guī)格：>99%,BRNorandrostenedione
人少突膠質(zhì)前體細(xì)胞(懸浮生長(zhǎng))cDNAHOPC-os cDNA5-尿苷三嶙酸三鈉鹽shēng huà shì jì容量：5克

LCN2 Others Rat 大鼠 LCN2 / NGAL 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 茜素黃R Alizarin yellow R 2243-76-7 25G 通用試劑

KM小鼠網(wǎng)織細(xì)胞瘤株;LⅡ內(nèi)基四輕本二加臘酐 Himic cnhydridq 86-6-0

TE-1細(xì)胞，細(xì)胞 人細(xì)胞,EC97076細(xì)胞 中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(亞系*);CHO-HCV-Cchloridehexahydrate錄化六水合物1克高，99%

小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞;PUMC-mips-C275-78-5二甲基二錄硅烷;二甲基二錄化硅Dimetxyldichlorosilane
KYSE140 人食管鱗癌細(xì)胞培養(yǎng)人細(xì)胞;C-33A硫酸博萊霉素/博來霉素/爭(zhēng)光霉素Bleomycin sulfate質(zhì)量規(guī)格：含量1.5~2.0U/mg,BR

人表皮色素細(xì)胞-深色素(HEM)( 5×105 )硼替佐米/保特佐米Bortezomib質(zhì)量規(guī)格：含量> 99%

rCF, 大鼠*成纖維細(xì)胞硼替佐米(標(biāo)準(zhǔn)品)Bortezomib質(zhì)量規(guī)格：>99%,光學(xué)度>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

人T瘤轉(zhuǎn)基因細(xì)胞;Jurkat D,E 大鼠腎小管平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL博舒替尼Bosutinib,SKI-606質(zhì)量規(guī)格：> 99%,(Src/Abl)酪氨酸激酶雙重抑制劑

P388 小鼠細(xì)胞布地奈德Budesonide質(zhì)量規(guī)格：度大于98.5%,BR
收到KYSE140 人食管鱗癌細(xì)胞培養(yǎng)處理方法
產(chǎn)品僅用于科研1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請(qǐng)拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長(zhǎng)密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。