細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程：

產(chǎn)品僅用于科研冷凍保存細(xì)胞之方法：
人臍內(nèi)皮（）細(xì)胞 冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

資源名稱(chēng)　人臍內(nèi)皮（）細(xì)胞
種屬：ECV304

類(lèi)型：貼壁生長(zhǎng)

形態(tài)：CM1-1培養(yǎng)液中，貼壁，上皮細(xì)胞樣，短粗梭形，緊密排列

提供形式：復(fù)蘇形式：T25培養(yǎng)瓶1瓶；或者凍存形式：2ml凍存管2支，干冰費(fèi)另計(jì)。

安全等級(jí)：1

模式：菌株未知

培養(yǎng)方法

傳代方法：將舊培養(yǎng)液吸除，PBS清洗兩遍后，加入6mL（/100mm皿）胰酶，在顯微鏡下觀察，期間禁止搖晃培養(yǎng)皿，細(xì)胞剛有脫落時(shí)，則吸除大部分胰酶，留約0.5mL，移至培養(yǎng)箱消化，約3min取出。傳代用12mL CM1-1培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打均勻細(xì)胞，后可分3~6皿培養(yǎng)；

生長(zhǎng)條件：37℃，5%CO2，CM1-1培養(yǎng)液。CM1-1培養(yǎng)液：90%DMEM-H+10%FBS。DMEM-H：DMEM高糖培養(yǎng)液，含谷氨酰胺，含丙酮酸鈉。

存儲(chǔ)條件：凍存則用6mL凍存液（90%FBS+10%DMSO）終止消化，吹打均勻，分為6支凍存管，用程序降溫盒于-80℃凍存，過(guò)夜轉(zhuǎn)移至液氮中保存。

細(xì)胞分類(lèi)：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶(hù)。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對(duì)于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說(shuō)是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒(méi)操作好；另外溫度對(duì)細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲(chǔ)存的zui好方式，快遞時(shí)間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過(guò)后，T-25灌滿(mǎn)培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶(hù)，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對(duì)細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買(mǎi)到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來(lái)源，100%保證5代以?xún)?nèi)，活力>95%，無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞凍存步驟：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
產(chǎn)品僅用于科研一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號(hào)16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

收到人臍內(nèi)皮（）細(xì)胞 處理方法
1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請(qǐng)拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落；先不要打開(kāi)培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸浮）、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長(zhǎng)密度超過(guò)80%，可正常傳代；若未超過(guò)80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無(wú)菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過(guò)80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過(guò)80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。
以下是人臍內(nèi)皮（）細(xì)胞 的相關(guān)熱銷(xiāo)產(chǎn)品：
大鼠*外分泌腺細(xì)胞;AR42J中性紅質(zhì)量規(guī)格：BSNeutral red

KIT Others Rat 大鼠 KIT / c-KIT 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 橙黃Ⅳ質(zhì)量規(guī)格：INDOrange Ⅳ

人上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL重水,氧化氘(50G)質(zhì)量規(guī)格：D,99.9%Deuterium Oxide

Tca8113-P160細(xì)胞，人舌癌細(xì)胞系 大腸埃希氏菌O157：H7 大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(低分化);PC-12(低分化)重水,氧化氘(100G)質(zhì)量規(guī)格：D,99.9%Deuterium Oxide

CCL23 Protein Human 重組人 CCL23 / MIP 3 蛋白 (His 標(biāo)簽)氘代硫酸(0.55 ml x 10)質(zhì)量規(guī)格：D,99.5%, acidity 90% IN D2O Sulfuric Acid-D2
IFNAR1 Others Cynomolgus 食蟹猴 IFNAR1 / IFNAR 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 3A分子篩(20-40目,氣相、液相色譜柱專(zhuān)用)質(zhì)量規(guī)格：20-40目,氣相、液相色譜柱專(zhuān)用Molecular sieves, 3 ?

人腎小球內(nèi)皮細(xì)胞裂解物HRGECL3A分子篩(40-60目,氣相、液相色譜柱專(zhuān)用)質(zhì)量規(guī)格：40-60目,氣相、液相色譜柱專(zhuān)用Molecular sieves, 3 ?

A2780細(xì)胞，人細(xì)胞 鮭魚(yú)胚胎細(xì)胞,CHSE細(xì)胞 腦微內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)3A分子篩(60-80目,氣相、液相色譜柱專(zhuān)用)質(zhì)量規(guī)格：60-80目,氣相、液相色譜柱專(zhuān)用Molecular sieves, 3 ?

BNL 1ME A.7R.1(小鼠肝上皮細(xì)胞) 5×106cells/瓶×23A分子篩(80-100目,氣相、液相色譜柱專(zhuān)用)質(zhì)量規(guī)格：80-100目,氣相、液相色譜柱專(zhuān)用Molecular sieves, 3 ?

HAoSMC Pellet 人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞團(tuán)塊 > 1 mio.cells 人無(wú)色素睫狀上皮細(xì)胞裂解物HNPCEpiCL1,6-二1酸果糖三鈉鹽(98-101.0%，BR)質(zhì)量規(guī)格：98-101.0%，BRFructose 1,6-bisphosphate, 3 salt
HFL1 人錄化芐基三乙，英文名或英文縮寫(xiě)：TEBAC，級(jí)別：CP，45.5%，規(guī)格：100毫克

CM-R043大鼠小腸平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL米諾地爾 Minoxidil,≥99% 38304-91-5 5G 通用試劑

U251人細(xì)胞草醋;二醋 litxium oxclctq 223-91-3

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細(xì)胞;HH-29 人腦膜細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL腺苷脫酶測(cè)試盒shēng huà shì jì容量：RT200支/包

人上皮細(xì)胞;MCF-10APH緩沖液　PH1.0(20℃)NA
人臍內(nèi)皮（）細(xì)胞 人牙齦成纖維細(xì)胞裂解物HGFL馬西替坦;ACT064992Macitentan質(zhì)量規(guī)格：>99%,內(nèi)皮素(ET)受體拮抗劑

CD59 Others Cynomolgus 食蟹猴 CD59 / CD59A / MAC-IP 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 組蛋白去乙?；敢种苿?/span>(M 344)M344質(zhì)量規(guī)格：>98%,HDAC抑制劑

人非小細(xì)胞;NCI-H19752-硝基咪唑 2-Nitroimidazole質(zhì)量規(guī)格：>98%,原裝進(jìn)口

MHCC97-L細(xì)胞，人低轉(zhuǎn)移細(xì)胞 小鼠細(xì)胞,P388細(xì)胞 兔腎細(xì)胞;RK-134-(三氟甲基)-1H-咪唑 4-(Trifluoromethyl)-1H-imidazole質(zhì)量規(guī)格：>98%

MADB106(大鼠癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×22-甲基-4-三氟甲基咪唑 2-Methyl-4-trifluoromethylimidazole質(zhì)量規(guī)格：>97%