乳酸乳球菌組成型表達(dá)質(zhì)粒培養(yǎng)冷凍保存細(xì)胞之方法：

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細(xì)胞凍存步驟：

資源名稱　乳酸乳球菌組成型表達(dá)質(zhì)粒培養(yǎng)
種屬：pMG36e

提供形式：20μl

模式：菌株未知

培養(yǎng)方法

傳代方法：收到質(zhì)粒后請短暫離心，取2μl轉(zhuǎn)化至對應(yīng)感受態(tài)中，挑取單*重新提取質(zhì)粒后使用。如需獲取其他詳細(xì)信息請聯(lián)系QQ客服查詢。
細(xì)胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復(fù)蘇手法對于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲存的zui好方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種：產(chǎn)品僅用于科研
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞培養(yǎng)過程：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
以下是乳酸乳球菌組成型表達(dá)質(zhì)粒培養(yǎng)的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
WISH(人羊膜細(xì)胞) 5×106cells/瓶×21,4,8,11-四氮雜環(huán)十四烷(>98.0%(T))1,4,8,11-Tetraazacyclotetradecane質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T)

HCASMC-c 人平滑肌細(xì)胞(HCASMC) 500,000cells 小腸隱窩上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)1,4,7-三氮雜環(huán)壬烷三鹽酸鹽(>98.0%(N)(T))1,4,7-Triazacyclononane Tri質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(N)(T)

肝竇內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)2-(6-氨基-9H-嘌呤-9-yl)乙醇-d42-(6-Amino-9H-purin-9-yl)ethanol-d4質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

CST9L Others Human 人 CST9L / Testatin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) N-6-(δ2-異戊1基)-腺嘌呤N-6-(δ2-Isopentenyl)-adenine質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

大鼠骨骼肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL9-(2',3',5'-三-氧基-苯甲基-β-D-阿糖)腺嘌呤9-(2',3',5'-Tri-O-benzyl-β-D-arabinofuranosyl)adenine質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口
MCF 7B(人癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 BHK(幼倉鼠腎細(xì)胞)21-辛酸酯質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口Hydrocortisone 21-caprylate

原代神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑Many types of cells包裝：5/2.5/1ml21-半琥珀酸鈉鹽質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口Hydrocortisone 21-hemisuccinate  salt

SHH Others Human 人 SHH / Sonic hedgehog (aa 1-197) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 3-(O-羧甲基)1質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口Hydrocortisone 3-(O-carboxymethyl)oxime

大鼠子宮頸上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL21-半琥珀酸酯質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口Hydrocortisone 21-hemisuccinate

Reh人急性非B非T細(xì)胞 Reh human acute non B non T lymphocytic leukemia IMDM培養(yǎng)基(GIBCO)+10%FBS氫化大豆卵1脂;氫化卵1脂質(zhì)量規(guī)格：>95%,BRHSPC;Lecithins Hydrogenated
CD5 Others Rat 大鼠 CD5 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) NEXTGEL7.5%ACRYLAMIDESOLNPROTNNEXT GEL 7.5%蛋白組學(xué)級500MLRT

人胎盤羊膜細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL(1S)-(-)-莰烷酰錄 (-)-Ccmphcnic ccid chloridq 39637-74-6

SAC-II B2細(xì)胞，小鼠腹水瘤細(xì)胞 BRL 3A(大鼠肝細(xì)胞) 人皮膚成纖維細(xì)胞;CCC-HSF-1洛伐他汀相關(guān)物質(zhì)A Lovcstctin Rqlctqd CoMpound c;dixy7no-lovcstctin 77217-9-4

CCL11 Protein Human 重組人 CCL11 蛋白 (His 標(biāo)簽)INDOXYL-B-DGLUCOSIDE吲哚-beta-D-葡萄糖苷100MGFROZEN

RD(人惡性胚胎橫紋肌瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 Angiopoietin-2 / ANG2 / ANGPT2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) N-芴甲氧羰酰基-D-本酸NA
乳酸乳球菌組成型表達(dá)質(zhì)粒培養(yǎng)HK-2, 人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細(xì)胞 Human培哚普利?；?/span>-α-D-葡萄糖苷酸Perindopril Acyl-α-D-glucuronide質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

MEP1A Others Human 人 MEP1A / PPHA 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 培哚普利?；?/span>-β-D-葡萄糖苷酸Perindopril Acyl-β-D-glucuronide質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

人主動脈內(nèi)皮細(xì)胞裂解物HAECL匹伐他汀內(nèi)酯Pitavastatin Lactone質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

TNFSF13B Others Cynomolgus 食蟹猴 BLyS / TNFSF13B / BAFF 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 哌唑嗪Prazosin質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

C3H/An小鼠結(jié)締組織細(xì)胞(L929-TK-);LTK-哌唑嗪-d8Prazosin-d8質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口
收到乳酸乳球菌組成型表達(dá)質(zhì)粒培養(yǎng)處理方法
產(chǎn)品僅用于科研1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時再進(jìn)行傳代操作。