大鼠主動脈內(nèi)皮細胞說明書冷凍保存細胞之方法：

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細胞凍存步驟：

資源名稱　大鼠主動脈內(nèi)皮細胞說明書
種屬：RAEC

模式：菌株未知
細胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復(fù)蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大，一旦細胞狀態(tài)不好，很難說是細胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對細胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細胞儲存的zui好方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種：產(chǎn)品僅用于科研
是我們復(fù)蘇好細胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運輸也對細胞影響也不大，只需加25元運費(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。
細胞培養(yǎng)過程：

細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?/span>10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。
以下是大鼠主動脈內(nèi)皮細胞說明書的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
5637人細胞 5637 human bladder cancer cells 1640+10% FBS2-(2-羥苯基)苯并噻唑(>98.0%(HPLC)(T))2-(2-Hydroxyphenyl)benzothiazole質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)(T)

TNF Protein Human 重組人 TNF-alpha / TNFA 蛋白1-氨基芘(>98.0%(HPLC)(T))1-Aminopyrene質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)(T)

大鼠脊柱神經(jīng)細胞(RSCMN)(1×106) UM-UC-3, 人膀胱移行細胞癌 Human2,5-二溴噻唑(>97.0%(GC))2,5-Dibromothiazole質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(GC)

肝星形細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)2,5-二溴硒酚(>98.0%(GC))2,5-Dibromoselenophene質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)

NP Others H3N2 甲型 H3N2 (A/Aichi/2/1968) 核蛋白 (Nucleoprotein / NP) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 2,6-二溴萘(>98.0%(GC))2,6-Dibromonaphthalene質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)
MDA-MB-435細胞，人癌高轉(zhuǎn)移細胞 鼠癌細胞系,MA-782細胞 原代滑膜皮細胞特制基礎(chǔ)無血清培養(yǎng)基Many types of cells包裝：500/100mlL-蛋氨酸乙酯鹽酸鹽;L-甲硫氨酸乙酯鹽酸鹽質(zhì)量規(guī)格：>98%(T),BRL-Mine ethyl ester

PATU8988(人*癌細胞) 5×106cells/瓶×2L-酪氨酸乙酯鹽酸鹽質(zhì)量規(guī)格：0.98L-Tyrosine ethyl ester 

HDLEC adult Pellet 人類皮膚管內(nèi)皮細胞團塊(成年捐獻者) > 1 mio.cells 角質(zhì)細胞生長添加物(不含BPE)KGS-2L-天冬氨酸-β-芐酯/L-天冬氨酸-4-芐酯質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRL-Aspartic acid β-benzyl ester

CL-0324BT-20(人癌細胞)5×106cells/瓶×2L-半胱氨酸甲酯鹽酸鹽質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRL-Cysteine methyl ester

ROR1 Others Human 人 ROR1 人細胞裂解液 (陽性對照) 甘氨酸甲酯鹽酸鹽質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRGlycine methyl ester
EFNB2A Protein Danio rerio (zebrafish) 重組斑馬魚 EFNB2A / Ephrin B2a 蛋白 (His 標(biāo)簽)4-(N,N-二苯氨基)苯(>98.0%(GC)(N))質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)(N)4-(N,N-Diphenylamino)benzaldehyde

Vero(非洲綠猴腎細胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠胚胎成纖維細胞;3T3-L1三(4-苯)胺(>96.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：>96.0%(GC)Tris(4-iodophenyl)amine

人小膠質(zhì)細胞裂解物HML賓雪德拉氏綠隱色堿(>98.0%(HPLC)(T))質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)(T)Bindschedler's Green Leuco Base

CLEC7A Others Human 人 CLEC7A / Dectin-1 / CLECSF12 人細胞裂解液 (陽性對照) 雙(4-苯基)胺(>98.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)Bis(4-iodophenyl)amine

人細胞;MKN-451-溴芘(>94.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：>94.0%(GC)1-Bromopyrene
大鼠主動脈內(nèi)皮細胞說明書SW038-C2-tk細胞，轉(zhuǎn)染了tk基因的SW038-C2細胞 副溶血性弧菌 人臍平滑肌細胞RNAHUVSMC miRNA5 μg潑尼Prednisone質(zhì)量規(guī)格：>98%,USP30,BR

SK-N-MC(人神經(jīng)上皮瘤細胞) 5×106cells/瓶×2潑尼(標(biāo)準(zhǔn)品)Prednisone質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

Hep 3B(人細胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0434SC-1(小鼠胚胎細胞)5×106cells/瓶×2 人腎小管上皮細胞;HKC強力霉素堿/強力霉素一水合物Doxycycline monohydrate/Doxycycline base質(zhì)量規(guī)格：>900μg/mg,USP,BR,可用于細胞培養(yǎng)

人組織細胞瘤細胞;U937 [U-937]唑來1酸Zoledronic acid hydrate質(zhì)量規(guī)格：>99%,一水化合物,BR

LRIG1 Others Mouse 小鼠 LRIG1 / LIG-1 人細胞裂解液 (陽性對照) 唑來1酸（標(biāo)準(zhǔn)品）Zoledronic acid hydrate質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
收到大鼠主動脈內(nèi)皮細胞說明書處理方法
產(chǎn)品僅用于科研1、首先，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。