細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程：

產(chǎn)品僅用于科研冷凍保存細(xì)胞之方法：
自然殺傷T細(xì)胞 冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

資源名稱　自然殺傷T細(xì)胞
種屬：NKT

類型：懸浮生長(zhǎng)

分離基物：人，NK細(xì)胞

模式：菌株未知

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基：1640，90%；FBS，10%；雙抗。

生長(zhǎng)條件：Temperature: 37.0°C Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%

存儲(chǔ)條件：Freeze medium: FBS/NBS, 92%; DMSO, 8% Storage temperature: liquid nitrogen vapor phase

細(xì)胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對(duì)于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說(shuō)是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒(méi)操作好；另外溫度對(duì)細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲(chǔ)存的zui好方式，快遞時(shí)間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過(guò)后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對(duì)細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來(lái)源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞凍存步驟：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
產(chǎn)品僅用于科研一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號(hào)16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

收到自然殺傷T細(xì)胞 處理方法
1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請(qǐng)拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落；先不要打開(kāi)培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長(zhǎng)密度超過(guò)80%，可正常傳代；若未超過(guò)80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無(wú)菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過(guò)80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過(guò)80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。
以下是自然殺傷T細(xì)胞 的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
狗肺成纖維樣細(xì)胞;DogL12-芴(>95.0%(T))2-Fluorenecarboxaldehyde質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(T)

GLIPR1 Others Mouse 小鼠 GLIPR1 / RTVP1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 2-羥基-9-芴酮(>90.0%(HPLC)(T))2-Hydroxy-9-fluorenone質(zhì)量規(guī)格：>90.0%(HPLC)(T)

破骨細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)2,6-二溴蒽醌(>95.0%(HPLC))2,6-Dibromoanthraquinone質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(HPLC)

Cyc-tAg細(xì)胞，小鼠T細(xì)胞瘤(SV40T抗原轉(zhuǎn)染) 人紫杉醇耐藥株,A2780/Taxol細(xì)胞 人肺動(dòng)脈成纖維細(xì)胞裂解物HPAFL2,7-二溴芴(>98.0%(GC))2,7-Dibromofluorene質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)

非洲綠猴腎細(xì)胞;GL-372,7-二溴-9-芴酮(>98.0%(GC))2,7-Dibromo-9-fluorenone質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)
MDBK (NBL-1)牛腎細(xì)胞 MDBK (NBL-1) of bovine kidney cell RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS維生素 D3 ((膽骨化醇)質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)4000萬(wàn)IU/gVitamin D3

IL18 Protein Mouse 重組小鼠 IL18 / IL-18 蛋白帕唑帕尼鹽酸鹽質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng) Pazopanib HCl

NCI-H524(人非小細(xì)胞細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 MCF7(癌細(xì)胞)噻托溴銨質(zhì)量規(guī)格：>97%,BR,無(wú)水物Tiotr bromide anhydrous

CL-0440SK-MEL-1(人皮膚色素瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2氨標(biāo)準(zhǔn)溶液（1000μg/ml,溶劑:水）質(zhì)量規(guī)格：1000μg/ml,溶劑:水Ammonia solution

TNFSF11 Others Human 人 RANKL / OPGL / TNFSF11 / CD254 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 酰嘧磺?。?biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品Amidosulfuron
MIF Protein Mouse 重組小鼠 MIF / Migration Inhibitory Factor 蛋白 (His 標(biāo)簽)4,4'-二氯二苯砜(>98.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)4,4'-Dichlorodiphenyl Sulfone

人胚胎*組織來(lái)源細(xì)胞;CCC-HPE-2 人平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL雙[3,5-二溴-4-(2-羥乙氧基)苯基]砜(>96.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：>96.0%(GC)Bis[3,5-dibromo-4-(2-hydroxyethoxy)phenyl] Sulfone

人羊膜細(xì)胞;WISH雙[4-(2-羥乙氧基)苯基]砜(>97.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(GC)Bis[4-(2-hydroxyethoxy)phenyl] Sulfone

人肺動(dòng)脈成纖維細(xì)胞 (HPAF)( 5×105 )二苯砜-3,3'-二磺酸二鈉鹽(>95.0%(T))質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(T)Diphenylsulfone-3,3'-disulfonic Acid Di Salt

CL-0317AML-193(人急性單核細(xì)胞單核細(xì)胞)5×106cells/瓶×25,10-二氫-5,10-二甲基吩嗪(>98.0%(GC)(N))質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)(N)5,10-Dihydro-5,10-dimethylphenazine
自然殺傷T細(xì)胞 軟骨細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)普伐他汀1,1,3,3-TetramethylbutylaminePravastatin 1,1,3,3-Tetramethylbutylamine質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口

JTB Others Human 人 Jumping anslocation Breakpoi / JTB 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 普伐他汀內(nèi)酯Pravastatin Lactone質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口

615小鼠網(wǎng)織細(xì)胞性瘤株;L615波尼龍-d6Prednisolone-d6質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口

SK-LU-1細(xì)胞，人低分化 大鼠腎成纖微細(xì)胞,NRK-49F細(xì)胞 CL-0106HFL1(人)5×106cells/瓶×2波尼龍21-半琥珀酸鈉鹽Prednisolone 21-hemisuccinate  salt質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口

T84(人腺癌肺轉(zhuǎn)移細(xì)胞) 5×106cells/瓶×26α-甲基波尼龍21-醋酸6α-Methylprednisolone 21-Acetate質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口