細(xì)胞培養(yǎng)過程：

產(chǎn)品僅用于科研冷凍保存細(xì)胞之方法：
人說明書冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

資源名稱　人說明書
種屬：NEC8

類型：貼壁生長

形態(tài)：CM5-1培養(yǎng)液中，貼壁，上皮細(xì)胞樣，多角形、梭形

分離基物：睪丸胚胎性癌；男性

提供形式：復(fù)蘇形式：T25培養(yǎng)瓶1瓶；或者凍存形式：2ml凍存管2支，干冰費另計。

安全等級：1

模式：菌株未知

培養(yǎng)方法

傳代方法：將舊培養(yǎng)液吸除，PBS清洗兩遍后，加入6mL（/100mm皿）胰酶，在顯微鏡下觀察，期間禁止搖晃培養(yǎng)皿，細(xì)胞剛有脫落時，則吸除大部分胰酶，留約0.5mL，移至培養(yǎng)箱消化，約2min取出。傳代用12mL CM5-1培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打均勻細(xì)胞，后可分3~6皿培養(yǎng)；

生長條件：37℃，5%CO2，CM5-1培養(yǎng)液。CM5-1培養(yǎng)液：90%Mc Coy’s 5a+10%FBS。Mc Coy’s 5a：Mc Coy’s 5a培養(yǎng)液。

存儲條件：凍存則用6mL凍存液（90%FBS+10%DMSO）終止消化，吹打均勻，分為6支凍存管，用程序降溫盒于-80℃凍存，過夜轉(zhuǎn)移至液氮中保存。

細(xì)胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復(fù)蘇手法對于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲存的zui好方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運輸也對細(xì)胞影響也不大，只需加25元運費(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞凍存步驟：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
產(chǎn)品僅用于科研一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。

收到人說明書處理方法
1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時再進行傳代操作。
以下是人說明書的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
HNE2-LMP1/2細(xì)胞，人細(xì)胞系 小鼠細(xì)胞,H22細(xì)胞 CM-H071人腎動脈平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL4-硝基兒茶酚4-NITROCATECHOL質(zhì)量規(guī)格：>98.0% ，進口分裝

OS-RC-2(人細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2曲格列酮Troglitazone(CS-045)質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

Promocell C-27101 Chondrocyte Growth Medium, 軟骨細(xì)胞生長培養(yǎng)基(即用型) 500ml2-氨基-4'-氟二苯甲酮2-Amino-4'-fluorobenzophenone 質(zhì)量規(guī)格：>98%

骨骼肌細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)2-氨基-4'-氯二苯甲酮2-amino-4'-chlorobenzophenone 質(zhì)量規(guī)格：大于98%，化學(xué)

WIF1 Others Mouse 小鼠 WIF1 / WIF-1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 原百部堿(標(biāo)準(zhǔn)品)Protostemonine質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品
MMP8 Others Mouse 小鼠 MMP8 / CLG1 CHO細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 尿嘧啶（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：含量測定Uracil

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細(xì)胞;KM9801溴丙胺肽林（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC法含量測定Propantheline bromide

豹貓肺成纖維樣細(xì)胞;LCL1 張氏肝細(xì)胞，HeLa[Chang Liver]細(xì)胞 LLC-PK1細(xì)胞，豬腎細(xì)胞鹽酸妥洛特羅（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC法含量測定Tulobuterol

人;HFL1無水1酸氫二鈉（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：含量測定N-(Isoxazol-5-yl)sulphanilamide

HA Others H6N1 甲型 H6N1 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 尿嘧啶 質(zhì)量規(guī)格：>99%,可用于細(xì)胞培養(yǎng)Uracil
MN-c, 小鼠皮質(zhì)神經(jīng)元DG-18瓊脂25毫升2～8℃

小鼠神經(jīng)干細(xì)胞BOC-D-天冬酸 Boc-Asp-OH,99% 13726-67-5 1G 通用試劑

人胚胎，皮膚，肌肉;M-22 人食管上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL布洛芬 Ibuprofqn 12687-7-1

人間充質(zhì)干細(xì)胞(脂肪)cDNAHMSC-ad cDNAMFC培養(yǎng)基1米

TNFSF11 Others Human 人 RANKL / OPGL / TNFSF11 / CD254 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 1400-62-0地衣紅ORCEIN
人說明書CFSC-2G細(xì)胞，大鼠肝星形細(xì)胞 7721(7721細(xì)胞) tTA基因修飾的小鼠*癌細(xì)胞(B類);Pan02-CAG-tTA-3E6前列地爾，素E1Alprostadil,PGE1,質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR,USP30

EFNB3 Protein Rat 重組大鼠 Ephrin-B3 / EFNB3 蛋白 (His 標(biāo)簽)四1雌酮,1丙孕素Altrenogest質(zhì)量規(guī)格：> 99%

Y1(Y-1) (小鼠腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠細(xì)胞;L1210四1雌酮,1丙孕素(標(biāo)準(zhǔn)品)Altrenogest質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

山羊腎上皮樣細(xì)胞;DG-K1鹽酸金剛烷胺Amantadine HCl質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

人膀胱基質(zhì)成纖維細(xì)胞(HBdSF)(5×105)鹽酸金剛烷胺（標(biāo)準(zhǔn)品）Amantadine HCl質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品