細胞培養(yǎng)過程：

產(chǎn)品僅用于科研冷凍保存細胞之方法：
人小細胞肺轉移細胞說明書冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

資源名稱　人小細胞肺轉移細胞說明書
種屬：0225-12ScacLym

形態(tài)：上皮細胞樣

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基：DMEM-H:Dulbecco＇sModifiedEagle＇sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS

生長特性：貼壁生長

細胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大，一旦細胞狀態(tài)不好，很難說是細胞自身不行，還是復蘇沒操作好；另外溫度對細胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細胞儲存的zui好方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質量；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種：
是我們復蘇好細胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶，排除復蘇造成影響，常溫運輸也對細胞影響也不大，只需加25元運費(順豐)。
質量保證：我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。
細胞凍存步驟：

細胞培養(yǎng)步驟：
產(chǎn)品僅用于科研一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。

收到人小細胞肺轉移細胞說明書處理方法
1、首先，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細胞形態(tài)、所用基礎培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)）；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細胞培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)基，預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內液體全部轉移至50ml無菌離心管內，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。
以下是人小細胞肺轉移細胞說明書的相關熱銷產(chǎn)品：
Hs68(人男性正常細胞) 5×106cells/瓶×2 變異鏈球菌碳酸鍶(>98%,BC)Strontium carbonate質量規(guī)格：>98%,BC

平滑肌細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)硫酸鍶(>98%,BC)Strontium sulfate質量規(guī)格：>98%,BC

TLR3 Others Mouse 小鼠 TLR3 / CD283 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 2'-甲氧基胞苷2’-OMe Cytidine質量規(guī)格：>98%,BR

人低轉移細胞株;PC-3M-2B4N2-異丁?；B苷一水合物ibu-rG質量規(guī)格：>98%,BR

FO細胞，細胞 人胚肝二倍體細胞,CCC-HEL-1細胞 CL-0208SH-SY5Y(人神經(jīng)母細胞瘤細胞)5×106cells/瓶×2N4-苯甲酰胞苷Bz-rC質量規(guī)格：>98%,BR
NCI-H1299(人非小細胞細胞) 5×106cells/瓶×2 甲型 H1N1 (A/USSR/90/1977) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) N-去甲基羅格列酮-d4質量規(guī)格：美國進口N-Desmethyl Rosiglitazone-d4

原代心肌細胞特制基礎無血清培養(yǎng)基Many types of cells包裝：500/100ml羅格列酮（鉀鹽）質量規(guī)格：美國進口Rosiglitazone (potassium salt)

EDAR Others Rat 大鼠 EDAR 人細胞裂解液 (陽性對照) 羅格列酮鹽酸鹽質量規(guī)格：美國進口rosiglitazone

大鼠胎兒表皮角質形成層細胞完全培養(yǎng)基 100mL5-羥基羅格列酮質量規(guī)格：美國進口5-Hydroxy Rosiglitazone

HaCaT人永生化表皮細胞 HaCaT immortalized human epidermal cells DMEM+10% FBS去甲異波爾定（標準品）質量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品Norisoboldine
TLR2 Others Rat 大鼠 TLR2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) GENEPAGE6%EZSQUEEZE*CLDPAK*6% GENE-PAGE, 擠壓式瓶裝生物技術級10X75MLCOLD

HK-2, 人腎皮質近曲小管上皮細胞氧基三本基錄化鏻 (Mqthoxymqthyl)triphqnylphosphonium chloridq 4009-98-7

RN-s, 大鼠紋狀體神經(jīng)元 [X464-20C]細胞 Vero(非洲綠猴腎細胞)左卡泥汀相關物質A Lqvoccrnitinq Rqlctqd CoMpound c;3-ccrboxy-N,N,N-triMqthyl-2-propqn-1-cMiniuM chloridq 6238/8/2

人十二脂腸腺癌;HuTu-80抑肽酶(牛肺)shēng huà shì jì容量：RT25克

CD4 Others Human 人 CD4 / LEU3 人細胞裂解液 (陽性對照) N-芴甲氧羰?；?/span>-L-亮酸NA
人小細胞肺轉移細胞說明書F11 Others Human 人 F11 / FXI 人細胞裂解液 (陽性對照) 羥基1灰石Hydroxyapatite質量規(guī)格：>99%,粒徑20nm

上皮細胞生長添加物-2EpiCGS-2羥丙基甲基纖維素(粘度11250-21000mPas)Hydroxy Propyl Methyl Cellulose/HPMC K15M質量規(guī)格：粘度11250-21000mPas

CTNNB1 Others Human 人 beta-Catenin / CTNNB1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 羥丙基甲基纖維素Hydroxypropylmethylcellulose質量規(guī)格：粘度55 - 60 mPa.s

人細胞;DU 145 [DU145;DU-145]羥丙基甲基纖維素(30000 mpa.s)HPMC, hydroxypropyl methyl cellulose質量規(guī)格：30000 mpa.s,BR

S-180細胞，腹水瘤細胞 人細胞,CRL-2780細胞 非洲綠猴腎細胞;VERO羥丙基甲基纖維素（4000mpas）HPMC, hydroxypropyl methyl cellulose質量規(guī)格：粘度K4m，4000 mpa.s