細胞培養(yǎng)過程：

產(chǎn)品僅用于科研冷凍保存細胞之方法：
TNFa轉(zhuǎn)染耐VP16絨癌細胞培養(yǎng)冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

資源名稱　TNFa轉(zhuǎn)染耐VP16絨癌細胞培養(yǎng)
種屬：JEG-3-VP16-TNFa

形態(tài)：上皮樣；多角　

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基：DMEM-H:Dulbecco＇sModifiedEagle＇sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS；400ug/mlG418

傳代方法：1:3傳代；3~4天1次。

生長特性：貼壁生長

存儲條件：基礎(chǔ)培養(yǎng)基：+5%DMSO+20%FBS

細胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大，一旦細胞狀態(tài)不好，很難說是細胞自身不行，還是復蘇沒操作好；另外溫度對細胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細胞儲存的zui好方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種：
是我們復蘇好細胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶，排除復蘇造成影響，常溫運輸也對細胞影響也不大，只需加25元運費(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。
細胞凍存步驟：

細胞培養(yǎng)步驟：
產(chǎn)品僅用于科研一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?/span>10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。

收到TNFa轉(zhuǎn)染耐VP16絨癌細胞培養(yǎng)處理方法
1、首先，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。⒓毎螒B(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)）；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。
以下是TNFa轉(zhuǎn)染耐VP16絨癌細胞培養(yǎng)的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
CL-0205Sf-9(昆蟲細胞)5×106cells/瓶×21,2'-二萘胺(升華精制品)(>98.0%(HPLC)(N))1,2'-Dinaphthylamine (purified by sublimation)質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)(N)

Dami細胞，巨核細胞 人分泌A2抗體B細胞,BB7.2細胞 人導管癌細胞;HCC38 N,N',N''-三苯基-1,3,5-苯三胺(>98.0%(HPLC)(T))N,N',N''-Triphenyl-1,3,5-benzenetriamine質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)(T)

A673(人橫紋肌瘤細胞) 5×106cells/瓶×23-吲哚乙酸(IAA)3-Indoleacetic acid質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

PVRL2 Others Human 人 CD112 / Nectin-2 / PVRL2 人細胞裂解液 (陽性對照) 葉酸(標準品)Folic acid質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

猴腎細胞;vero IgRCD4-葉酸Folic acid質(zhì)量規(guī)格：>97%,BR
ORM2 Others Human 人 ORM2 人細胞裂解液 (陽性對照) 黃芩苷質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥80%，BRBaicalin

人腸動脈內(nèi)皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL黃芩苷質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥90%，進口分裝Baicalin

APP-PS1細胞，人APP-PS1雙基因轉(zhuǎn)染細胞株(HEK293) 宋內(nèi)氏志賀氏菌(Sh.sonnei) 山羊腎上皮樣細胞;DG-K1黃芩素（標準品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品Baicalein

CXCL10 Protein Human 重組人 CXCL10 / Crg-2 蛋白黃芩素質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥95%,BRBaicalein

OS-RC-2(人細胞) 5×106cells/瓶×2 人 FSH alpha / TSH alpha / CGA 人細胞裂解液 (陽性對照) 黃芪皂苷I(標準品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品Astragaloside I
615小鼠T細胞性瘤株;L7712 小鼠腎實質(zhì)細胞完全培養(yǎng)基 100mL肌1，英文名或英文縮寫：Creatinine，級別：BR，99%，規(guī)格：1克

mOPC, 小鼠少突膠質(zhì)前體細胞 Mouse4-本基-2-丁同 Bqnzylccqtonq 220-6-7

EM1 Others Human 人 EM1 人細胞裂解液 (陽性對照) 聚蔗糖 PM 70 Ficoll PM 70 72146-89-5 10G 分離試劑

人惡性色素瘤細胞;A-375 [A375]AEBSFxy7nochloride4-(2-乙基)本磺酰扶鹽酸鹽5毫克試劑級，98%

人成纖維母細胞-新生兒(HDF-n)( 5×105 )sulfate 100g/1kg/5kg原裝 Sigma M1880
TNFa轉(zhuǎn)染耐VP16絨癌細胞培養(yǎng)NRL2 化大家鼠肺成纖維樣細胞去氧紫草素(標準品)Deoxyshikonin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標準品

牛腎細胞;MDBKTariquidar,XR-9576Tariquidar,XR-9576質(zhì)量規(guī)格：>98%,P-糖蛋白抑制劑

ACHN, 人腎細胞腺癌細胞鈦黃;達旦黃；鈦鎳黃Titan yellow質(zhì)量規(guī)格：BS

人皮膚色素瘤細胞;SK-MEL-1 大鼠上皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL雙水楊酯;水楊酸-2-羧基苯酯Sasapyrine質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

腎實質(zhì)細胞Many types of cells包裝：5 ×105方(1ml)雙水楊酯 ;水楊酸-2-羧基苯酯Sasapyrine質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR