細(xì)胞培養(yǎng)過程：

產(chǎn)品僅用于科研冷凍保存細(xì)胞之方法：
人惡性多發(fā)性培養(yǎng)冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

資源名稱　人惡性多發(fā)性培養(yǎng)
種屬：NTERA-2

形態(tài)：上皮樣

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基：DMEM-H:Dulbecco＇sModifiedEagle＇sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS　

傳代方法：該細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)需要維持較高的密度，T75瓶中至少接種5×106個(gè)細(xì)胞。每2~3天傳代1次。

生長特性：貼壁生長　

存儲(chǔ)條件：基礎(chǔ)培養(yǎng)基：+5%DMSO+20%FBS

細(xì)胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對(duì)于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對(duì)細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲(chǔ)存的zui好方式，快遞時(shí)間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對(duì)細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞凍存步驟：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
產(chǎn)品僅用于科研一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號(hào)16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

收到人惡性多發(fā)性培養(yǎng)處理方法
1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請(qǐng)拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。⒓?xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。
以下是人惡性多發(fā)性培養(yǎng)的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
人細(xì)胞;SF7634,5-雙(甲硫代)-1,3-二硫醇-2-酮(>98.0%(GC))4,5-Bis(methylthio)-1,3-dithiol-2-one質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)

FL62891細(xì)胞，人肝細(xì)胞 小鼠腹水瘤細(xì)胞,SAC-II C3細(xì)胞 長尾綠猴腎細(xì)胞;4647二巰基馬來腈二鈉(>90.0%(N))Di Dimercaptomaleonitrile質(zhì)量規(guī)格：>90.0%(N)

Molt-4(人急性母細(xì)胞細(xì)胞) 5×106cells/瓶×25(6)-氨基熒光素5(6)-Aminofluorescein質(zhì)量規(guī)格：0.9

Promocell C-23120 Fibroblast Growth Medium 2KIT, 成纖維細(xì)胞生長培養(yǎng)基2型套裝 500ml5-FAM, SE；5-羧基熒光素琥珀酯5-Carboxyfluorescein N-succinimidyl ester質(zhì)量規(guī)格：0.9

間充質(zhì)干細(xì)胞生長添加物MSCGS5,6-FAM；5(6)-羧基熒光素5(6)-Carboxyfluorescein質(zhì)量規(guī)格：0.95
Psi2 DAP(小鼠胚胎成纖維細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2心房利鈉肽（1-28）,大鼠質(zhì)量規(guī)格：>95%,BRAtrial Natriuretic Peptide (1-28),rat

DU 145(人細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0230Tca-8113(人舌鱗癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 敘利亞倉鼠細(xì)胞系;Syrian Hamster AV12心房利鈉肽（126-149）質(zhì)量規(guī)格：>95%,BRAtrial Natriuretic Peptide (126-149) (rat)

小鼠*癌細(xì)胞(B類);Pan02心房利鈉肽（126-150），大鼠質(zhì)量規(guī)格：>95%,BRAtrial Natriuretic Peptide (126-150) (rat)

15. 視覺細(xì)胞系統(tǒng)心鈉素Ⅰ，大鼠質(zhì)量規(guī)格：>95%,BRAtriopeptin I (rat)

CM-M098小鼠內(nèi)臟脂肪細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL克林霉素鹽酸鹽一水合物質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口Clindamycin  Monohydrate
人;Calu-35-IDC脫氧胞苷25克生物技術(shù)級(jí)，90%

CSF1R Others Human 人 CSF1R / MCSF Receptor / CD115 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 一縮二炳二醇(異構(gòu)體的混合物) 1,1'-Oxydi-2-propcnol 110-98-2

CM-H102細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL甘露醇 Mcnnitol 69-62-8

HCT116, 人結(jié)細(xì)胞 ,AtT20細(xì)胞 COS-7(非洲青猴腎細(xì)胞)乙酸铔，英文名或英文縮寫：Ammonium acetate，級(jí)別：BR，規(guī)格：250毫克

小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;PA317letheen 培養(yǎng)基NA
人惡性多發(fā)性培養(yǎng)Hs 578T 人癌細(xì)胞蘇丹藍(lán)II/溶劑藍(lán)35Sudan Blue II/Solvent Blue 35質(zhì)量規(guī)格：BS

SW-13人腎上腺皮質(zhì)小細(xì)胞癌細(xì)胞 SW-13 cells of small cell carcinoma of adrenal cortex L-15培養(yǎng)基(GIBCO)+10%FBS甲基紅Methyl red質(zhì)量規(guī)格：IND

FIGF Protein Mouse 重組小鼠 VEGF-D / VEGFD / FIGF 蛋白 (His 標(biāo)簽)間甲基紅m-Methyl red質(zhì)量規(guī)格：IND

大鼠小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞(RM)(5×105) JEC, 人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞系 Human甲基紅鈉鹽/酸性紅2Methyl Red  salt質(zhì)量規(guī)格：IND

水牛皮膚成纖維樣細(xì)胞;WB-S3西諾沙星；新惡酸Cinoxacin質(zhì)量規(guī)格：>99%,進(jìn)分