細胞培養(yǎng)過程：

產(chǎn)品僅用于科研冷凍保存細胞之方法：
瘤牛皮膚細胞 冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

資源名稱　瘤牛皮膚細胞
種屬：BIN-S1

形態(tài)：成纖維細胞樣

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基：M-199:withEarle＇sBalancedSaltsSolution(EBSS)15%NBS

生長特性：貼壁生長

細胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大，一旦細胞狀態(tài)不好，很難說是細胞自身不行，還是復蘇沒操作好；另外溫度對細胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細胞儲存的zui好方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種：
是我們復蘇好細胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶，排除復蘇造成影響，常溫運輸也對細胞影響也不大，只需加25元運費(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。
細胞凍存步驟：

細胞培養(yǎng)步驟：
產(chǎn)品僅用于科研一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?/span>10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。

收到瘤牛皮膚細胞 處理方法
1、首先，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。⒓毎螒B(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)）；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。
以下是瘤牛皮膚細胞 的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
人結(jié)直腸腺癌細胞;LS 174T [LS174T]酞菁(>93.0%(N))Phthalocyanine質(zhì)量規(guī)格：>93.0%(N)

Ke-3細胞，人細胞 大鼠細胞,FAT細胞 CL-0186PIEC(豬髖動脈內(nèi)皮細胞 )5×106cells/瓶×2顏料藍15,酞菁藍BPigment Blue 15質(zhì)量規(guī)格：

U-937(人組織細胞瘤細胞) 5×106cells/瓶×25-羥基羅格列酮硫酸鹽5-Hydroxy Rosiglitazone Sulfate質(zhì)量規(guī)格：美國進口

HPlEpC-c 人類胎盤細胞上皮細胞 500,000cells 食管平滑肌細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)N-去甲基羅格列酮N-Desmethyl Rosiglitazone質(zhì)量規(guī)格：美國進口

組織源性原代細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)/1ml5-羥基羅格列酮β-D-葡萄糖苷酸5-Hydroxy Rosiglitazone β-D-Glucuronide質(zhì)量規(guī)格：美國進口
RK2 Others Canine 狗 kB / RK2 人細胞裂解液 (陽性對照) 普伐他汀內(nèi)酯質(zhì)量規(guī)格：美國進口Pravastatin Lactone

中國倉鼠卵巢細胞;CHO波尼龍-d6質(zhì)量規(guī)格：美國進口Prednisolone-d6

Tul-1細胞，人細胞系 大鼠肝上皮樣干細胞,WB-F344細胞 T-101B胰蛋白酶(含100mL 酶解緩沖液)10mL波尼龍21-半琥珀酸鈉鹽質(zhì)量規(guī)格：美國進口Prednisolone 21-hemisuccinate  salt

SK-MES-1(人肺鱗癌細胞) 5×106cells/瓶×26α-甲基波尼龍21-醋酸質(zhì)量規(guī)格：美國進口6α-Methylprednisolone 21-Acetate

HUVEC-c pre-screened 預選型正常人臍內(nèi)皮細胞(HUVEC) 500,000cells 大隱平滑肌細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)偏鋁酸鈉(分子生物學級)質(zhì)量規(guī)格：分子生物學級 metaaluminate
SW116細胞，人細胞 人葡萄膜色素細胞,UM細胞 人結(jié)直腸腺癌細胞;Caco-2特級胎牛血清1克RT，避光

Hep 3B(人細胞) 5×106cells/瓶×2二藍 Xylene blue 116-95-0 5G 通用試劑

AGRP Others Human 人 AgRP 人細胞裂解液 (陽性對照) 3-吲哚全 Indolq-3-ccrboxcldqhydq 487-89-8

人角膜上皮細胞HCEpiC雙岐桿菌生化基礎(chǔ)培養(yǎng)基100克

SECTM1 Others Human 人 SECTM1 / K12 人細胞裂解液 (陽性對照) 1665-00-5氘代二錄-D2DICHLOROmetxANE-D2
瘤牛皮膚細胞 CL-0121Hut-102(人皮膚T瘤細胞)5×106cells/瓶×2吳茱萸堿Evodiamine質(zhì)量規(guī)格：≥98%(T)，BR

U251人細胞 細胞，HEC-1B細胞 MDA-MB-468(癌細胞)五味子丙素（標準品）Schisandrin C質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

人腎上腺皮質(zhì)腺癌細胞;NCI-H295R五味子醇甲(標準品)Schisandrol A質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

HA Others H7N7 甲型 H7N7 (A/Netherlands/219/03) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽性對照) 五味子醇乙（標準品）Schisandrol B質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

兔角膜后基質(zhì)層成纖維細胞;RCBBF五味子甲素(標準品)Schizandrin A質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標準品