人內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)冷凍保存細(xì)胞之方法：

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細(xì)胞凍存步驟：

資源名稱　人內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)
種屬:HemECs

提供形式:T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶/凍存管

模式菌株:未知

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:90%高糖DMEM+10%FBS

生長條件:95%空氣+5%二氧化碳37攝氏度

生長特性:貼壁生長

存儲條件:50%高糖DMEM+40%FBS+10%DMSO 液氮
細(xì)胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復(fù)蘇手法對于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲存的zui好方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運輸也對細(xì)胞影響也不大，只需加25元運費(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞培養(yǎng)過程：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。
以下是人內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;C3H 10T1/2 2A62-[2-(2-t-Boc-氨基乙氧基)乙氧基]乙醇2-[2-(2-t-Boc-aminoethoxy)ethoxy]ethanol 質(zhì)量規(guī)格：美國進口原裝

95-C細(xì)胞，人低轉(zhuǎn)移細(xì)胞 大鼠腎小管上皮細(xì)胞，NRK細(xì)胞 CL-0154MDCK(犬腎細(xì)胞)5×106cells/瓶×22'-脫氧-2',2'-二氟尿嘧啶核苷2’,2’-Difluoro-2’-deoxyuridine  質(zhì)量規(guī)格：美國進口原裝,97%

TSCCa(人舌鱗癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2BMS 582664Brivanib alaninate質(zhì)量規(guī)格：>97%

HCF-c 人類的*成纖維細(xì)胞(HCF) 500,000cells 神經(jīng)元細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)龍膽二糖Gentiobiose質(zhì)量規(guī)格：>96%，原裝進口

腦內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)西洛多辛Silodosin質(zhì)量規(guī)格：>98%
TE 115.T細(xì)胞，人軟組織細(xì)胞 SV40永生化的人胚腎上皮細(xì)胞,293T細(xì)胞 腎小球內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)異鼠李素-3-O-葡萄糖苷(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Isorhamnetin-3-O-β-D-Glucoside

羊源細(xì)胞異鼠李素-3-O-新橙皮苷(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Isorhamnetin-3-O-neohespeidoside

SFRP2 Others Mouse 小鼠 sFRP2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 異土木香內(nèi)酯（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Isoalantolactone

CL-0063CNE(人細(xì)胞)5×106cells/瓶×2異烏藥內(nèi)酯/異烏藥內(nèi)酯（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Isolinderalactone

ST6GALNAC2 Others Mouse 小鼠 STHM / ST6GALNAC2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 異綠原酸C(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Isochlorogenic acid C
KLE(人細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2紡錘菌素二鹽酸shēng huà shì jì容量：100克

Promocell C-28010 Mesenchymal Stem CellGrowth Medium, 間充質(zhì)干細(xì)胞生長培養(yǎng)基(即用型) 500ml偶氮二異丁晴(陰涼)(*) 2,2'-czobis(2-mqthylpropionitnilq)

人氣管平滑肌細(xì)胞總RNAHTSMC NA瓊脂糖蛋白Ashēng huà shì jì容量：RT1克

PGLYRP1 Others Mouse 小鼠 PGLYRP / TNFSF3L 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 大孔吸附樹脂D101shēng huà shì jì容量：5克

HT1080 人成細(xì)胞7411-49-63，3-二基聯(lián)本胺鹽酸鹽3,3',4,4'-Bipxenyltetramine tetraxy7nochloride
人內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)大鼠肺泡巨噬細(xì)胞;NR8383[AgC11x3A; NR8383.1]三氧化二鉻(>99%，BR)Chromium (III) oxide質(zhì)量規(guī)格：>99%，BR

PLC/PRF/5細(xì)胞，人亞歷山大細(xì)胞系 小鼠胚成纖維包裝細(xì)胞,PA317細(xì)胞 CL-0018A9(小鼠皮下結(jié)締組織細(xì)胞)5×106cells/瓶×2四氧化三鈷(>99%，BR)Cobalt (II, III ) oxide質(zhì)量規(guī)格：>99%，BR

SPC-A-1(人細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2乙酸鈷四水(>99.5%,BR)Cobaltous acetate, tetrahydrate質(zhì)量規(guī)格：>99.5%,BR

HDMEC-c adult 人真皮微內(nèi)皮細(xì)胞(HDMEC)來自成年捐獻者 500,000cells 肝竇內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)鈷粉(>99%，BR)Cobaltous powder質(zhì)量規(guī)格：>99%，BR

小梁網(wǎng)細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)銅粉(>99.5%,BR)Copper powder質(zhì)量規(guī)格：>99.5%,BR
收到人內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)處理方法
1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達80%左右時再進行傳代操作。