細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程：

冷凍保存細(xì)胞之方法：
貓星形腦膠質(zhì)細(xì)胞說(shuō)明書冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

資源名稱　貓星形腦膠質(zhì)細(xì)胞說(shuō)明書
種屬:PG-4 (S+L-)

類型:貼壁生長(zhǎng)

形態(tài):膠質(zhì)、星形細(xì)胞樣，CM5-1培養(yǎng)液中，貼壁，成纖維細(xì)胞樣，長(zhǎng)條形

提供形式:復(fù)蘇形式：T25培養(yǎng)瓶1瓶；或者凍存形式：2ml凍存管2支，干冰費(fèi)另計(jì)。

安全等級(jí):1

模式菌株:未知

培養(yǎng)方法

傳代方法:將舊培養(yǎng)液吸除，PBS清洗兩遍后，加入6mL（/100mm皿）胰酶，在顯微鏡下觀察，期間禁止搖晃培養(yǎng)皿，細(xì)胞剛有脫落時(shí)，則吸除大部分胰酶，留約0.5mL，移至培養(yǎng)箱消化，約3min取出。傳代用12mL CM5-1培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打均勻細(xì)胞，后可分3~6皿培養(yǎng)；

生長(zhǎng)條件:37℃，5%CO2，CM5-1培養(yǎng)液。CM5-1培養(yǎng)液：90%Mc Coy’s 5a+10%FBS。Mc Coy’s 5a：Mc Coy’s 5a培養(yǎng)液。

存儲(chǔ)條件:凍存則用6mL凍存液（90%FBS+10%DMSO）終止消化，吹打均勻，分為6支凍存管，用程序降溫盒于-80℃凍存，過(guò)夜轉(zhuǎn)移至液氮中保存。

細(xì)胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對(duì)于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說(shuō)是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒(méi)操作好；另外溫度對(duì)細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲(chǔ)存的zui好方式，快遞時(shí)間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過(guò)后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對(duì)細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來(lái)源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞凍存步驟：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號(hào)16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

收到貓星形腦膠質(zhì)細(xì)胞說(shuō)明書處理方法
1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請(qǐng)拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。⒓?xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長(zhǎng)密度超過(guò)80%，可正常傳代；若未超過(guò)80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無(wú)菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過(guò)80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過(guò)80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。
以下是貓星形腦膠質(zhì)細(xì)胞說(shuō)明書的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
幼蚊細(xì)胞;C6/36 大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤，PC-12細(xì)胞 HeLa 229(細(xì)胞)L-異亮氨酸叔丁酯鹽酸鹽L-Isoleucine t-butyl ester 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

人上皮細(xì)胞;Hep-2L-谷氨酰胺(標(biāo)準(zhǔn)品)L-Glutamine 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

PRMT6 Others Human 人 PRMT6 / HRMT1L6 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 谷胱甘肽（還原型）Glutathione (Reduced);GSH質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

犬腎細(xì)胞;MDCK(NBL-2)L-谷胱甘肽（標(biāo)準(zhǔn)品）Glutathione (Reduced)質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品,還原型

F3 Others Human 人 Coagulation Factor III / Tissue Factor / CD142 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 谷胱甘肽（氧化型）Glutathione(Oxidized)質(zhì)量規(guī)格：度大于98%,BR
非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-E2;Vero-HCV-E2 人癌細(xì)胞，MCF-7細(xì)胞 SPC-A-1()地美司鈉質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口Dimesna

人卵巢;PA-1甲磺酸多拉司瓊質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BRDolasetron mesylate

ICAM2 Others Human 人 CD102 / ICAM2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 地拉羅司,去鐵斯若質(zhì)量規(guī)格：>99.0%Deferasirox

CM-H069人膀胱平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL地拉羅司(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品Deferasirox

CPLX3 Others Human 人 CPLX3 / Complexin 3 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 利培酮質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)Risperidone
SF9, 昆蟲卵巢細(xì)胞 其它疊氮-赤-鞘氨醇質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口Azido-erythro-sphingosine

CD19 Others Mouse 小鼠 CD19 / Leu-12 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) DL-赤-二氫鞘氨醇質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口DL-erythro-Dihydrosphingosine

人滋養(yǎng)層絨毛細(xì)胞裂解物HVTLD-赤-二氫-D-鞘氨醇-1-1酸鹽質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口D-erythro-Dihydro-D-sphingosine-1-phosphate

IFNA8 Others Human 人 Ierferon alpha-B / IFNA8 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 籠形D-赤-鞘氨醇-1-1酸鹽質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口Caged D-erythro-Sphingosine-1-phosphate

BALB/C小鼠肝上皮細(xì)胞;BNL 1ME A.7R.1L-(-)-葡萄糖(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：>98%,標(biāo)準(zhǔn)品L-(-)-Glucose
貓星形腦膠質(zhì)細(xì)胞說(shuō)明書SKOV3 [SK-OV-3], 人腺癌細(xì)胞系 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞,3T6細(xì)胞 ES-2(人卵巢透明細(xì)胞癌細(xì)胞)三亞乙基硫代1酰胺Triethylenethiophosphoramide質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

小鼠癌細(xì)胞;CCC-Ca761-03普拉克索堿Pramipexole Base質(zhì)量規(guī)格：>98.5%

CD4 Others Mouse 小鼠 CD4 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 普拉克索堿（標(biāo)準(zhǔn)品）Pramipexole Base質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;3T3-L1染料木素/金雀異黃酮Genistein質(zhì)量規(guī)格：≥98%,BR

EFNB2 Others Canine 狗 Ephrin-B2 / EFNB2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 染料木素/金雀異黃酮(標(biāo)準(zhǔn)品）Genistein質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品