人工程細(xì)胞 冷凍保存細(xì)胞之方法：

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細(xì)胞凍存步驟：

資源名稱　人工程細(xì)胞
種屬：EBTC-1

形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基：DMEM-H:Dulbecco＇sModifiedEagle＇sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS

生長特性：貼壁生長
細(xì)胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對(duì)于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對(duì)細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲(chǔ)存的zui好方式，快遞時(shí)間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種：產(chǎn)品僅用于科研
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對(duì)細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞培養(yǎng)過程：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號(hào)16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
以下是人工程細(xì)胞 的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
溶液AMS乳酸環(huán)丙沙星Ciprofloxacin lactate質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

GALK1 Others Human 人 GALK1 / Galactokinase 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 甲酰環(huán)丙沙星Formyl Ciprofloxacin質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

人絨癌細(xì)胞;JEG-36'-(二乙氨基)-1',2'-苯并熒烷(>98.0%(GC)(T))6'-(Diethylamino)-1',2'-benzofluoran質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)(T)

LLC Lewis細(xì)胞，細(xì)胞 人細(xì)胞,(+)9811細(xì)胞 猴腎細(xì)胞;vero IgRCD4-2'-(二芐氨基)-6'-(二乙氨基)熒烷(>98.0%(HPLC)(T))2'-(Dibenzylamino)-6'-(diethylamino)fluoran質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)(T)

雜交瘤(B類);Z172A4C4C6F3G123',6'-二甲氧基熒烷(>98.0%(HPLC))3',6'-Dimethoxyfluoran質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)
RM1(大鼠肌肉成纖維樣細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2三甲基乙酸(>99%,BR)質(zhì)量規(guī)格：>99%,BRTrimethylacetic acid

H4(人腦神經(jīng)細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0328CEM/C1(人急性細(xì)胞細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 小耳豬肺細(xì)胞;SEP-L1轉(zhuǎn)染試劑（溶液）質(zhì)量規(guī)格：>95%，分子生物學(xué)級(jí)Transfection Reagents-Biofection

小鼠樹突狀細(xì)胞低轉(zhuǎn)移細(xì)胞(VAP33-GFP融合蛋白穩(wěn)定過表達(dá));DG6-VAP33-GFP反式肉桂醛(>95%，BR)質(zhì)量規(guī)格：>95%，BRtrans-Cinnamaldehyde

人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞(HRPEpiC)(5×105 )富勒1 C60()，球 C60質(zhì)量規(guī)格：>99.5%(HPLC)Fullerene C60 (pure)

CM-M051小鼠子宮頸上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL焦1酸(>45%，BR)質(zhì)量規(guī)格：>45%，BRPyrophosphoric acid
人肺間充質(zhì)干細(xì)胞裂解物HPMSCL對(duì)藍(lán)，英文名或英文縮寫：BCIP，級(jí)別：CP，98.5%，規(guī)格：1毫克

CL Others Human 人 CL-1 / CL / Chymoypsin-like protease 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 硼完四輕溶液(+4℃) Borcnq-tqtrcxy7nofurcn complqx 14044-62-6

615小鼠株;Ca759兒價(jià)分桔黃四鈉，英文名或英文縮寫：xyleol Orange tetrawo7ium salt，級(jí)別：高，規(guī)格：5克

L-02細(xì)胞，正常人肝細(xì)胞 人APP-PS1(M146L)雙基因轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞株,7WML6.0細(xì)胞 中國倉鼠卵巢細(xì)胞(亞系*);CHO-DUKXB11-prepro-TGFβ2 cDNA-TGF-β Dinding Protein cDNA碳酸銫，英文名或英文縮寫：Cesium caonate，級(jí)別：BR，97%，規(guī)格：25克

LLC(小鼠細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2NeutralRed 5g/25g/100g原裝 Amresco E895
人工程細(xì)胞 兔腎細(xì)胞;RK13他唑巴坦鈉 Tazobactam 質(zhì)量規(guī)格：含量>90%%,BR

NOV Others Canine 狗 CCN3 / NOV 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 他唑巴坦鈉 (標(biāo)準(zhǔn)品)Tazobactam 質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定，標(biāo)準(zhǔn)品

CL-0133KLE(人細(xì)胞)5×106cells/瓶×2D-環(huán)絲氨酸D-Cycloserine質(zhì)量規(guī)格：>98%,效價(jià)>900μg/mg,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)

P3/NS1/1-Ag4-1細(xì)胞，鼠細(xì)胞 人B細(xì)胞瘤細(xì)胞,RAMOS(RA.1)細(xì)胞 小鼠子細(xì)胞;U14D-環(huán)絲氨酸(標(biāo)準(zhǔn)品)D-Cycloserine質(zhì)量規(guī)格：標(biāo)準(zhǔn)品用于含量測(cè)定

ARPE-19(人視網(wǎng)膜上皮細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2鹽酸四環(huán)素Tetracycline 質(zhì)量規(guī)格：Purity>98%,Potency≥900μg/mg, USP grade
收到人工程細(xì)胞 處理方法
產(chǎn)品僅用于科研1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請(qǐng)拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。