人急性早幼粒細(xì)胞培養(yǎng)冷凍保存細(xì)胞之方法：

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細(xì)胞凍存步驟：

資源名稱　人急性早幼粒細(xì)胞培養(yǎng)
種屬:NB4

類型:懸浮生長

形態(tài):CM2-1培養(yǎng)液中，懸浮，淋巴母細(xì)胞樣，圓形，少數(shù)聚團(tuán)生長

提供形式:復(fù)蘇形式：15ml離心管1支；或者凍存形式：2ml凍存管2支，干冰費(fèi)另計。

安全等級:1

模式菌株:未知

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:90%RPMI-1640+10%FBS

傳代方法:將培養(yǎng)好的懸浮細(xì)胞輕輕吹打均勻，分配至3~6個新鮮培養(yǎng)液皿中，輕輕搖勻后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)；

生長條件:37℃，5%CO2，CM2-1培養(yǎng)液。CM2-1培養(yǎng)液：90%RPMI-1640+10%FBS。RPMI-1640：1640培養(yǎng)液，含谷氨酰胺。

存儲條件:將懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)移至離心管中，(110g，3min)離心，離心完成后用6mL凍存液（90%FBS+10%DMSO）重懸細(xì)胞，吹打均勻，分為6支凍存管，用程序降溫盒于-80℃凍存，過夜轉(zhuǎn)移至液氮中保存。
細(xì)胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復(fù)蘇手法對于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲存的zui好方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實(shí)驗室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞培養(yǎng)過程：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
以下是人急性早幼粒細(xì)胞培養(yǎng)的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
小鼠色素瘤細(xì)胞;B16L-天冬氨酸二甲酯鹽酸鹽L-Aspartic acid dimethyl ester 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

中國倉鼠卵巢細(xì)胞(亞系*);CHO-DUKXB11-prepro-TGFβ1 Cdna-TGF-β1 Dinding Protein cDNA 細(xì)胞，Hepa 1-6細(xì)胞 M145細(xì)胞，猴腎C細(xì)胞CBZ-D-纈氨酸N-Cbz-D-valine質(zhì)量規(guī)格：0.98

人胚肺二倍體細(xì)胞;KMB-17Z-Arg(Mtr)-OH·CHAZ-Arg(Mtr)-OH·CHA質(zhì)量規(guī)格：0.98

JAM3 Others Mouse 小鼠 JAM3 / JAM-C 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) CBZ-L-賴氨酸甲酯鹽酸鹽;N(ε)-芐氧羰基-L-賴氨酸甲酯鹽酸鹽H-Lys(Z)-OMe 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%

腦微內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)N-CBZ-D-丙氨酸Z-D-Ala-OH質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR
TNFRSF10B Others Mouse 小鼠 AILR2 / TNFRSF10B 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 固綠FCF質(zhì)量規(guī)格：BSFast Green FCF

CM-M048小鼠腸巨噬細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL子種綠A；藍(lán)A質(zhì)量規(guī)格：BSAlphazurine A

PROC Others Mouse 小鼠 PROC1 / Protein C / PROC 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 日落黃質(zhì)量規(guī)格：BSSunset Yellow FCF

平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基SMCM-prf1黃；檸檬黃；酸性黃 23質(zhì)量規(guī)格：BSTartrazine

TOV-112D細(xì)胞，人上皮性細(xì)胞 人腎小管近段上皮細(xì)胞,HK-2細(xì)胞 子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)酸性黃17質(zhì)量規(guī)格：ARAcid Yellow 17
腎小球內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)CAPS; 3-(環(huán)已胺)丙磺酸質(zhì)量規(guī)格：>99%CAPS

STXBP1 Others Human 人 STXBP1 / UNC18A 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 巴豆苷（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Crotonoside

小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞;PUMC-mips-B6巴西蘇木素（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Brazilin

T/G HA-VSMC細(xì)胞，人主動脈平滑肌細(xì)胞 人胚肝細(xì)胞正常,QSG-7701細(xì)胞 CL-0064CoC1(人細(xì)胞)5×106cells/瓶×2菝葜皂苷元（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Sarsasapogenin

人APP-PS1(M146L)雙基因轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞株;7WML6.0阿托伐他汀叔丁基酯質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口Atorvastatin tert-Butyl Ester
人急性早幼粒細(xì)胞培養(yǎng)原代成纖維細(xì)胞特制無血清添加劑Many types of cells包裝：1ml腺苷 5'-1酰硫酸 鈉鹽Adenosine 5'-phosphosulfate  salt 質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;HT-29 大鼠細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mLN6-苯甲基-5’-乙基甲酰胺基腺苷N6-Benzyl-5'-ethylcarboxamido Adenosine 質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

FO 小鼠細(xì)胞P1,P5-Di（腺苷-5'-)五1酸鹽，五鈉鹽P1,P5-Di(adenosine-5') pentaphosphate penta salt 質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

ERBB2 Others Rat 大鼠 ErbB2 / HER2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) P1,P5-Di(腺苷-5'-)五1酸鹽，五銨鹽e pentaammonium saltP1,P5-Di(adenosine-5') pentaphosphate pentaammonium salt質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

小鼠T瘤細(xì)胞(雞OVA基因修飾);E.G7-OVAN6-苯甲基腺苷N6-Benzyl Adenosine 質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口
收到人急性早幼粒細(xì)胞培養(yǎng)處理方法
1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸浮）、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時再進(jìn)行傳代操作。