培養(yǎng)操作步驟：
人永生化角質(zhì)形成細胞培養(yǎng)1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布； 
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）； 
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時； 
4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中； 
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。 

資源名稱　人永生化角質(zhì)形成細胞
種屬:Hacat

類型:貼壁

形態(tài):上皮細胞樣

分離基物:Hacat細胞源自一位62歲患有男性的病灶外圍正常皮膚

安全等級:1

模式菌株:未知

應用領(lǐng)域:Hacat細胞角蛋白、角化細胞交聯(lián)外膜蛋白、中間絲相關(guān)蛋白陽性。

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:MEM＋15% FBS＋1% P/S

生長條件:氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃

細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用*化等方法使細胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備  記錄方式可采用攝影照片、縮時電影、電視等多種手段。
5.研究的范圍比較廣泛
應用的學科領(lǐng)域較為寬廣，如細胞學、免疫學、學、生物化學、遺傳學、分子生物學等； 
適用的對象范圍廣，從低等動物到高等動物，一種動物的不同年齡階段以及不同組織，都可進行有針對性的研究。
6.研究的費用相對較經(jīng)濟可提供大量、同一時期、重復性好的、生物學性狀相似的實驗對象。
以下是公司正在在熱銷的產(chǎn)品：
HCT116/L 人耐奧沙利鉑耐藥株alpha-熊果苷(標準品)alpha-Arbutin 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標準品

SEMA4D Others Mouse 小鼠 Semaphorin-4D / SEMA4D / CD100 人細胞裂解液 (陽性對照) L-羥基脯氨酸(標準品)L-Hydroxyproline質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

人APP-PS1(C410Y)雙基因轉(zhuǎn)染細胞株;7WCY1.0L-羥基脯氨酸L-Hydroxyproline質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

SDC1 Others Rat 大鼠 Syndecan-1 / SDC1 / CD138 人細胞裂解液 (陽性對照) L-正亮氨酸L-Norleucine質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

人臍帶單核細胞完全培養(yǎng)基 100mLFmoc-D-4-苯丙氨酸Fmoc-4-iodo-D-Phe-OH質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%
黃牛皮膚細胞;BTA-S2亮抑蛋白酶肽(進口)質(zhì)量規(guī)格：≥95%,進口半硫酸鹽Leupeptin

KLK13 Others Human 人 KLK13 / Kallikrein-13 人細胞裂解液 (陽性對照) 胃酶抑素A;抑肽素;胃蛋白酶抑制劑質(zhì)量規(guī)格：≥90%,進分Pepstatin A microbial

CM-H052人胎盤絨毛膜細胞完全培養(yǎng)基100mL膽紅素質(zhì)量規(guī)格：≥85%,BRBilibubin

IL9R Others Rat 大鼠 IL9R / Ierleukin 9 receptor 人細胞裂解液 (陽性對照) 比伐盧定(TFA)質(zhì)量規(guī)格：度大于98%Bivalirudin TFA

小鼠脈絡膜細胞完全培養(yǎng)基 100mL比馬素/貝美前列素質(zhì)量規(guī)格：度> 99%Bimatoprost
Promocell C-28051 Monocyte Attachme Medium, 單核細胞附著培養(yǎng)基(即用型) 250ml薄荷醇（標準品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品Menthol

人上皮樣細胞;BEAS-2B補骨脂定（標準品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品Psoralidin

DCBLD2 Others Human 人 DCBLD2 / ESDN / CLCP1 人細胞裂解液 (陽性對照) 補骨脂二氫黃酮;補骨脂甲素質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品Bavachin

CL-0368INS-1(大鼠胰島細胞瘤細胞)5×106cells/瓶×2補骨脂酚(標準品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品Bakuchiol

EL4IL-2細胞，瘤細胞 人急性早幼粒細胞,NB4細胞 人晶體上皮細胞永生系;SRA01/04(HLE)D-(-)-奎寧酸（標準品）質(zhì)量規(guī)格：≥98%，標準品D-(?)-Quinic acid
人永生化角質(zhì)形成細胞培養(yǎng)大鼠肝細胞;BRL 3A托伐普坦 Tolvaptan質(zhì)量規(guī)格：度≥99.0%，BR,可用于細胞培養(yǎng)

GDF15 Others Human 人 GDF-15 人細胞裂解液 (陽性對照) 磺胺噻唑Sulfathiazole質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

小鼠胚胎成纖維細胞MEF磺胺噻唑(標準品)Sulfathiazole質(zhì)量規(guī)格：含量測定

MARK3 Others Human 人 MARK3 / CTAK1 / EMK-2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 環(huán)苯扎林鹽酸鹽Cyclobenzaprine HCl質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

人胚肝二倍體細胞;CCC-HEL-1鹽酸美托咪定Medetomidine HCl質(zhì)量規(guī)格：≥99.0%,BR
操作流程：
1.1主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細胞的復蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細胞48h換液1次，細胞長至60%～70%融合時，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散，為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞，待細胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細胞懸液，用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù)，按公式計算出細胞數(shù)。細胞數(shù)/ml原液＝(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞，以0.25％胰酶消化成單細胞懸液，計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時隨機取出3瓶細胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞，加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×100％，計算貼壁率。 
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔，計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d，繪制細胞生長曲線
人永生化角質(zhì)形成細胞培養(yǎng)來源可靠（源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等知名品牌），活力>95%，貼壁性好。我們從試劑、包被器皿、凍存原代細胞、新鮮原代細胞、原代細胞的分子學實驗等提供全程服務。我司擁有專業(yè)的實驗室，可無菌操作并提供相關(guān)科研項目解決方案以及實驗服務。