小鼠胰島素瘤胰島a細(xì)胞 冷凍保存細(xì)胞之方法：

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細(xì)胞凍存步驟：

資源名稱　小鼠胰島素瘤胰島a細(xì)胞
種屬:alpha TC1 clone 6

類型:alpha cells

形態(tài):epithelial

提供形式:T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶/凍存管

安全等級(jí):2

模式菌株:未知

應(yīng)用領(lǐng)域:The alpha TC1 clone 6 cells are useful for studying many aspects of islet biology, including glucagon biosynthesis and cytokine sensitivity.

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:90%高糖DMEM+10%FBS

傳代方法:Volumes used in this protocol are for 75 cm2 flasks; proportionally reduce or increase amount of dissociation medium for culture vessels of other sizes. NOTE: Warm all solutions to 37.0°C prior to use Transfer all medium and floating cells from flask to a 50 mL centrifuge tube. Adherent cells are removed using Cell Dissociation Buffer (an enzyme free buffer; Invitrogen, Catalog No. 13150-016) diluted 1:5 with Hanks' Balanced Salt Solution. Add 5.0 mL of diluted cell dissociation buffer per 75 cm2 flask and gently rock flask to bathe the cells at room temperature for 1 to 2 minutes. Allow the flask to remain at room temperature for 1 to 5 additional minutes until cells have detached from the flask. Firmly tap the flask against palm of hand to dislodge cells. Add 10.0 mL of fresh medium per 75 cm2 flask and triturate up and down directing the stream along the growth surface of the flask to dislodge the cells and break up some of the clumps. Transfer these cells to the centrifuge tube from Step 1. Centrifuge at 125 x g  for 5 to 10 minutes. Remove medium and resuspend pellet in fresh complete medium. Add appropriate aliquots of cell suspension to new culture vessels. Incubate cultures at 37°C. Subcultivation ratio: A subcultivation ratio of 1:3 to 1:4 is recommended. Medium renewal: Every 2 to 3 days.

生長(zhǎng)條件:95%空氣+5%二氧化碳 37攝氏度

生長(zhǎng)特性:adherent, with loosely attached clusters and some single cells in suspension

存儲(chǔ)條件:50%高糖DMEM+40%FBS+10%DMSO 液氮
細(xì)胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對(duì)于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說(shuō)是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對(duì)細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲(chǔ)存的zui好方式，快遞時(shí)間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過(guò)后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對(duì)細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來(lái)源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號(hào)16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
以下是小鼠胰島素瘤胰島a細(xì)胞 的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
人APP-PS1雙基因轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞株;7WPS1雙去氧基姜黃素(標(biāo)準(zhǔn)品)Bisdemethoxycurcumin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

TNFRSF9 Others Mouse 小鼠 4-1BB / TNFRSF9 / CD137 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) L-山梨糖(標(biāo)準(zhǔn)品)L-(-)-Sorbose質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品

KP-N-NS 人腎上腺神經(jīng)母細(xì)胞瘤()糖精鈉 水合物(標(biāo)準(zhǔn)品)Saccharin  salt hydrate質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品

SiHa人子宮頸鱗癌細(xì)胞 SiHa human uterine cervical squamous cell carcinoma MEM培養(yǎng)基(GIBCO)+10%FBS標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.05000mol/L(0.1N))Iodine solution質(zhì)量規(guī)格：0.05000mol/L(0.1N)

SHH Protein Mouse 重組小鼠 SHH / Sonic hedgehog 蛋白 (His 標(biāo)簽)標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml,溶劑：水)Iodine solution質(zhì)量規(guī)格：1000μg/ml,溶劑：水
家貓皮膚細(xì)胞;FCA-S1 胚，HFL-I細(xì)胞 IEC-6細(xì)胞，大鼠小腸隱窩上皮細(xì)胞檸檬酸三丙酯(>97.0%(T))質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(T)Tripropyl

人正常肺上皮細(xì)胞;BEAS-2BN-丁基苯磺酰胺(>98.0%(HPLC)(N))質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)(N)N-Butylbenzenesulfonamide

CD200R1L Others Cynomolgus 食蟹猴 CD200RLa 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) D-(+)-樟腦(>98.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)(+)-Camphor

原代成纖維細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑Many types of cells包裝：5/2.5/1ml阿卡波糖十三醋酸酯質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口Acarbose Tridecaacetate

CD38 Others Rabbit 兔 SCARB3 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 檸檬苦素，黃柏內(nèi)酯(橙皮提取) 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,橙皮提取Limonin
TF-1(人血液細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠細(xì)胞;BC3H1CHAPSO3-[(3-膽胺基)二甲基基]-2-羥基-1-磺酸內(nèi)鹽25克ACS

人間充質(zhì)干細(xì)胞-*裂解物HMSC-hp L沒食子酸一水物 Gallic acid,≥98.0% 99-24-1 25G 通用試劑

AXR2 Others Mouse 小鼠 AXR2 / CMG2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 肝速內(nèi);肝速;肝鱗脂 Hqpcrin wo7ium sclt;Hqpscl;Lipohqpin;LiquqMin;Lipohqpinqttq;Longhqpcrin;Monopcrin;Pcnhqprin;Pulcrin 9041-8-1

正常小鼠Leydig細(xì)胞;TM3選擇性巧克力平板1米

小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞;PUMC-mips-D2 III型膠原酶(含100mL酶解緩沖液) 10mL13494-80-9碲塊Tellurium
小鼠胰島素瘤胰島a細(xì)胞 小鼠皮質(zhì)神經(jīng)元MN-c桑皮苷A（標(biāo)準(zhǔn)品）Mulberroside A質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

MSLN Others Human 人 MSLN / Mesothelin 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 桑色素(標(biāo)準(zhǔn)品)Morin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

大鼠*上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL沙苑子苷A（標(biāo)準(zhǔn)品）Complanatoside A質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

BALL-1人B細(xì)胞急性細(xì)胞 BALL-1 B acute lymphoblastic leukemia cells 90%RPMI1640(內(nèi)含2mM L-glutamine)+10%胎牛血清山梔苷甲酯（標(biāo)準(zhǔn)品）Shanzhiside methylester質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

EGF Protein Canine 重組狗 EGF / Epidermal Growth Facto 蛋白 (His 標(biāo)簽)商陸皂苷甲(標(biāo)準(zhǔn)品)Esculentoside A質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品
收到小鼠胰島素瘤胰島a細(xì)胞 處理方法
1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請(qǐng)拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸浮）、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長(zhǎng)密度超過(guò)80%，可正常傳代；若未超過(guò)80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無(wú)菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過(guò)80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過(guò)80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。