人細(xì)胞8305C（干細(xì)胞庫保藏）說明書冷凍保存細(xì)胞之方法：

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細(xì)胞凍存步驟：

資源名稱　人細(xì)胞8305C（干細(xì)胞庫保藏）說明書
種屬:8305C

類型:甲狀腺

形態(tài):上皮細(xì)胞

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:人細(xì)胞8305C完全培養(yǎng)液配方（100 ml）： EMEM (Invitrogen, 11090081) 88 ml Glutamin(Invitrogen, 25030081) 1 ml Non-essential Amino Acids, 100× (Invitrogen, 11140) 1 ml FBS (Gibco) 10 ml 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度。
細(xì)胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲存的zui好方式，快遞時(shí)間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞培養(yǎng)過程：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
以下是人細(xì)胞8305C（干細(xì)胞庫保藏）說明書的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
人細(xì)胞;Hela S3 [HeLaS3] 大鼠大隱平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL5-乙酰水楊酸5-Acetylsalicylic acid質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

AtT20 小鼠細(xì)胞N-芐基甘氨酸N-Benzylglycine質(zhì)量規(guī)格：>98.0%,BR

VSIG4 Others Human 人 VSIG4 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 扎那米韋Zanamivir質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR,一水物

人癌細(xì)胞;MDA-MB-435S扎那米韋(標(biāo)準(zhǔn)品)Zanamivir質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98.0%,標(biāo)準(zhǔn)品

IL2RA Others Cynomolgus 食蟹猴 IL2RA 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 去氧氟尿苷/5'-脫氧-5-氟尿嘧啶核苷Doxifluridine/5-Fluoro-5′-deoxyuridine質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR
平滑肌細(xì)胞生長添加物-無血清SMCGS-sf滅草?。?biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品Monuron

TE 353.Sk細(xì)胞，人正常皮膚細(xì)胞 人胚腎上皮包裝細(xì)胞,GP2-293細(xì)胞 原代滑膜皮細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑Many types of cells包裝：5/2.5/1ml煙嘧磺?。?biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品Nicosulfuron

山羊腎上皮樣細(xì)胞;DG-K1鈮標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml)質(zhì)量規(guī)格：1000μg/mlNiobium standard

REN Others Human 人 RENIN 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 鎳標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/mL，基體:1%HNO3)質(zhì)量規(guī)格：100μg/mL，基體:1%HNO3Nickel Standard

CM-M125小鼠牙細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液(500mg/L,溶劑：水)質(zhì)量規(guī)格：500mg/L,溶劑：水Potassium standard
Hut-78細(xì)胞，皮膚T細(xì)胞瘤 人平滑肌,T/G細(xì)胞 人低侵襲性脈絡(luò)膜色素素瘤細(xì)胞;OCM-1ASulfo NHS;N-羥基硫代琥珀質(zhì)量規(guī)格：>99%,BRsulfo-NHS

A9(小鼠皮下結(jié)締組織細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2亞甲蘭,亞甲基藍(lán)質(zhì)量規(guī)格：BSMethylene Blue

PVRL2 Others Human 人 CD112 / Nectin-2 / PVRL2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 鹽酸沃尼妙林質(zhì)量規(guī)格：>97%,BRValnemulin HCl

水牛皮膚成纖維樣細(xì)胞;WB-S51酸泰樂菌素質(zhì)量規(guī)格：>95%,BRTylosin phosphate

DKKL1 Others Human 人 DKKL1 / Soggy-1 / SGY-1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 白鮮堿(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品Dictamnine
人細(xì)胞8305C（干細(xì)胞庫保藏）說明書96-C細(xì)胞，低轉(zhuǎn)移細(xì)胞 人細(xì)胞,PC-3細(xì)胞 人膀胱基質(zhì)成纖維細(xì)胞總RNAHBdSF NA替卡格雷Ticagrelor質(zhì)量規(guī)格：>99%,II晶型

非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-p7;Vero-HCV-p7替卡格雷(標(biāo)準(zhǔn)品)Ticagrelor質(zhì)量規(guī)格：>99%,光學(xué)度>97%,標(biāo)準(zhǔn)品

AHSG Others Mouse 小鼠 Fetuin-A / AHSG 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 鹽酸雷莫司瓊Ramosetron HCl質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

小鼠網(wǎng)織細(xì)胞;M5076鹽酸司維拉姆Sevelamer HCl質(zhì)量規(guī)格：BR

IL5 Others Canine 狗 IL5 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 碳酸司維拉姆Sevelamer carbonate質(zhì)量規(guī)格：BR;Binding of  Phosphate 4.0~7.0mmo1/g
收到人細(xì)胞8305C（干細(xì)胞庫保藏）說明書處理方法
1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。⒓?xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。