細(xì)胞培養(yǎng)過程：

冷凍保存細(xì)胞之方法：
綠色熒光蛋白標(biāo)記人結(jié)細(xì)胞形態(tài)冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

資源名稱　綠色熒光蛋白標(biāo)記人結(jié)細(xì)胞形態(tài)
種屬:HCT116-GFP

形態(tài):上皮樣；多角形

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:IMDM:Iscove＇sModiefiedDulbecco＇sMedium10%FBS；200ug/mlG418　

生長特性:貼壁生長

細(xì)胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復(fù)蘇手法對于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲存的zui好方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞凍存步驟：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

收到綠色熒光蛋白標(biāo)記人結(jié)細(xì)胞形態(tài)處理方法
1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。⒓?xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時再進(jìn)行傳代操作。
以下是綠色熒光蛋白標(biāo)記人結(jié)細(xì)胞形態(tài)的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
ACO1 Others Human 人 ACO1 / irp1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 羥基匹格列酮（M-Ⅳ）Hydroxy Pioglitazone (M-IV)質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

兔間變表皮鱗株;VX2N-氧基帕洛諾司瓊Palonosetron N-Oxide質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

BxPC-3細(xì)胞，原位*腺癌細(xì)胞 鼠細(xì)胞,P3X63-Ag8.653細(xì)胞 人細(xì)胞;EC109帕珠沙星Pazufloxacin質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

BALB/C小鼠肝瘤株;BNL 1ME A.7R.1培美曲塞二鈉Pemetrexed Di質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

SELE Others Human 人 E-Selectin / CD62E 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 培美曲塞二鈉-d5Pemetrexed-d5 Di Salt質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口
人肺微內(nèi)皮細(xì)胞 (HPMEC)( 5×105 ) rRTEC, 大鼠腎小管上皮細(xì)胞 Rattus柯諾辛堿質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥95%，標(biāo)準(zhǔn)品Corynoxine

雪旺細(xì)胞生長添加物SCGS烏拉地爾(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品Urapidil

LILRA3 Others Human 人 ILT6 / LILRA3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 夫西地酸鈉質(zhì)量規(guī)格：>97%,BRFusidate

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細(xì)胞;KMY0928夫西地酸鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品Fusidate

CNE1細(xì)胞，人細(xì)胞(高分化) 小鼠細(xì)胞,P3-X63-Ag8.653細(xì)胞 草魚*細(xì)胞;L8824芒果苷質(zhì)量規(guī)格：≥90%,BRMangiferin
人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞(脂肪)(HMSC-ad)(5×105)L-谷酸，英文名或英文縮寫：H-Glu(OMe)-OMe.HCl，級別：特，98.0%，規(guī)格：5克

CM-R024大鼠成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL芴甲氧羰基-L-天冬... Fmoc-Asp(OtBu)-OH (HPLC,≥98.0%) 71989-14-5 5G 通用試劑

小鼠腎集合管細(xì)胞(SV40轉(zhuǎn)化);M-1 小鼠小腸內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL亞鐵繞啉離子還原溶液 FqRROIN 14634-91-4

CSC, 小鼠心肌細(xì)胞 Mouse4-metxoxybenzoicacid對甲氧基本酸1克高，99%

SPARC Others Mouse 小鼠 SPARC / BM-40 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 姆沙伯 W HPChromosorb W-HP
綠色熒光蛋白標(biāo)記人結(jié)細(xì)胞形態(tài)人角膜成纖維細(xì)胞 (HcorF)( 5×105 )順式-4,7,10,13,16,19-二十二碳六1酸(標(biāo)準(zhǔn)品)DHA質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品

CM-M067小鼠腎足突細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL二甲硝咪唑(標(biāo)準(zhǔn)品)Dimetridazole質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品

小鼠成肌細(xì)胞;C2C12 小鼠胰島細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL青霉素V鉀(標(biāo)準(zhǔn)品)Penicillin V potassium salt質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品

人間充質(zhì)干細(xì)胞-肝 Human2-NP-AOZ(標(biāo)準(zhǔn)品)2-NP-AOZ質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品

CD180 Others Human 人 CD180 / RP105 / LY64 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 磺胺醋酰(標(biāo)準(zhǔn)品)Sulfacetamide質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品