細(xì)胞培養(yǎng)過程：

冷凍保存細(xì)胞之方法：
人惡性瘤株 冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

資源名稱　人惡性瘤株
種屬:A-375[A375]

形態(tài):實(shí)體瘤

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:-

傳代方法:制備成細(xì)胞懸液接種至小鼠成瘤。

生長特性:體內(nèi)生長

存儲(chǔ)條件:基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS

細(xì)胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲(chǔ)存的zui好方式，快遞時(shí)間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞凍存步驟：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號(hào)16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

收到人惡性瘤株 處理方法
1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。
以下是人惡性瘤株 的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
CM-R006大鼠完全培養(yǎng)基100mL?；敲撗跄懰徕cTaurodeoxycholic acid  salt質(zhì)量規(guī)格：>97%,BR

5637, 人細(xì)胞 蓖麻蠶卵細(xì)胞,NISE-Sacy-12細(xì)胞 TE 353.Sk(人正常皮膚細(xì)胞)rU亞1酰胺單體rU Phosphoramidite質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

小鼠腎足細(xì)胞;Mouse podocyteBz-rA亞1酰胺單體Bz-rA Phosphoramidite質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

TNFRSF17 Others Mouse 小鼠 BCMA / TNFRSF17 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) i-bu-rG亞1酰胺單體i-bu-rG Phosphoramidite質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

人導(dǎo)管癌細(xì)胞;ZR-75-1PF299804（EGFR抑制劑）Dacomitinib質(zhì)量規(guī)格：>99%,可用于細(xì)胞培養(yǎng)
人平滑肌細(xì)胞cDNAHCSMC cDNA無水碳酸鈉質(zhì)量規(guī)格：AR,≥99.8% carbonate anhydrous

NCL-H460細(xì)胞，非小細(xì)胞 人肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞,HPAEC細(xì)胞 肝動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)D-果糖質(zhì)量規(guī)格：>99%,BRD-Fructose

犬腎細(xì)胞;MDCK(NBL-2)核黃素1酸鈉水合物質(zhì)量規(guī)格：核黃素73.0 ~79.0%Riboflavin 5'-monophosphate  salt hydrate

TNFRSF10A Others Human 人 TNFRSF10A / CD261 / APO2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 溴化乙錠溶液，10 mg/ml質(zhì)量規(guī)格：>98%,BREB, Ethidium bromide stock solution, 10 mg/ml

CL-0231TE-1(人細(xì)胞)5×106cells/瓶×2APMSF(進(jìn)分)質(zhì)量規(guī)格：進(jìn)分,sigma A6664p-APMSF,
Raji人Butt's瘤細(xì)胞 Raji human Butt's lymphoma cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS葡聚糖T7shēng huà shì jì容量：50毫克

FGF12 Protein Canine 重組狗 FGF12 蛋白4-肖基-L-本炳安醋 4-nitno-3-phqnyl-L-clcninq 949-99-2

AML-193(人急性單核細(xì)胞單核細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 人神經(jīng)細(xì)胞HN尿酸酶shēng huà shì jì容量：25克

人腎小球內(nèi)皮細(xì)胞cDNAHRGEC cDNACOOMASSIEBRILLIANTBLUEG-250考馬斯亮蘭G-250超級藍(lán)色至紅色結(jié)晶粉末RTsigma

IFNGR1 Others Cynomolgus 食蟹猴 IFNGR / IFNGR1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 12027-06-4化銨;化铔AMMoniuM iodide
人惡性瘤株 人胚胎;WI-38三醋酸甘油酯(>Glycerol triacetate質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

PIEC細(xì)胞，豬髖動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞 人細(xì)胞,T84細(xì)胞 CM-H061人腎小球內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL甘氨酸鈉(>Glycine  salt質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

大鼠胰島細(xì)胞瘤細(xì)胞;INS-1乙醇酸(>Glycolic acid質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

RK1 Others Human 人 kA / RK1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 硬脂酸單甘油酯(>GMS, glycerol monostearate質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

心肌細(xì)胞Many types of cells包裝：5 ×105方(1ml)氯化金Gold (III) chloride tetrahydrate質(zhì)量規(guī)格：BC