細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程：

冷凍保存細(xì)胞之方法：
人乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌旁皮膚細(xì)胞 冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

資源名稱(chēng)　人乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌旁皮膚細(xì)胞
種屬:CCD-1095Sk

類(lèi)型:皮膚

形態(tài):成纖維細(xì)胞

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:MEM培養(yǎng)基(GIBCO,貨號(hào)41500034，添加NaHCO3 1.5g/L，Sodium Pyruvate 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度。

生長(zhǎng)特性:貼壁生長(zhǎng)

細(xì)胞分類(lèi)：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對(duì)于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說(shuō)是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒(méi)操作好；另外溫度對(duì)細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲(chǔ)存的zui好方式，快遞時(shí)間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過(guò)后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對(duì)細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買(mǎi)到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來(lái)源，100%保證5代以?xún)?nèi)，活力>95%，無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞凍存步驟：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號(hào)16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

收到人乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌旁皮膚細(xì)胞 處理方法
1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請(qǐng)拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落；先不要打開(kāi)培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。⒓?xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長(zhǎng)密度超過(guò)80%，可正常傳代；若未超過(guò)80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無(wú)菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過(guò)80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過(guò)80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。
以下是人乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌旁皮膚細(xì)胞 的相關(guān)熱銷(xiāo)產(chǎn)品：
人癌細(xì)胞;SK-BR-31-(叔丁基二甲硅基)咪唑(>98.0%(T))1-(tert-Butyldimethylsilyl)imidazole質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T)

CD59A Others Mouse 小鼠 CD59a / MAC-IP 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) N-代丁二(>N-Iodosuccinimide質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

MJ(懸浮) 瘤N',N-二甲基甘氨酸鹽酸鹽(>N-N-Dimethylglycine 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

95-D人高轉(zhuǎn)移細(xì)胞 Human high metastatic lung cancer cell line 95-D RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS正壬基-beta-D-麥牙糖苷(>98%,BC)n-Nonyl-beta-D-maltopyranoside質(zhì)量規(guī)格：>98%,BC

SERPINA12 Protein Human 重組人 Vaspin / SerpinA12 蛋白 (His 標(biāo)簽)正辛基-beta-D-麥牙糖苷(>98% (HPLC),BC)n-Octyl-b-D-maltopyranoside質(zhì)量規(guī)格：>98% (HPLC),BC
人APP基因轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞株;7WD10硬脂酸(50%)質(zhì)量規(guī)格：含量50%，藥用級(jí)Stearic acid

HFL-I細(xì)胞，人胚 鼠肌原細(xì)胞,C2C12細(xì)胞 T-105BIII型膠原酶(含100mL酶解緩沖液)10mL硬脂酸(98%)質(zhì)量規(guī)格：含量98%,藥用級(jí)Stearic acid

SK-N-SH(人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2牛蒡苷元(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Arctigenin

HUVEC-c Growth Medium 2single donor 500,000cells Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)牛蒡子苷（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Arctiin

原代細(xì)胞特制基礎(chǔ)無(wú)血清培養(yǎng)基Many types of cells包裝：500/100ml尿嘧啶（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC法含量測(cè)定Uracil
EC109，人細(xì)胞 Human桿菌肽鋅shēng huà shì jì容量：100克

CTSE Others Mouse 小鼠 CTSE / Cathepsin-E 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) CBZ-硫苯基-L-半胱... N-Z-S-phenyl-L-cysteine,97% 159453-24-4 1G 通用試劑

人間充質(zhì)干細(xì)胞-*RNAHMSC-hp miRNA5 μg羌炳基基纖維速 HyproMqllosq;xy7noxypropyl Mqthylcqllulosq 9004-62-3

LOXL2 Others Human 人 LOXL2 / Lysyl oxidase homolog 2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 3-本酸shēng huà shì jì容量：100克

OVCaR-3 人細(xì)胞第威德合金DEVARDA'S ALLOY
人乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌旁皮膚細(xì)胞 小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞;BV2順式-孟魯司特cis-Montelukast質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口

CX3CL1 Others Canine 狗 Fractalkine / CX3CL1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 21(R)-羥基孟魯司特21(R)-Hydroxy Montelukast質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口

HuH-7人細(xì)胞21(S)-羥基孟魯司特21(S)-Hydroxy Montelukast質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口

LIEP-P細(xì)胞，小細(xì)胞細(xì)胞 人細(xì)胞,UI-1細(xì)胞 人臍動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞總RNAHUAEC NA孟魯司特二環(huán)己基胺鹽Montelukast Dicyclohexylamine Salt質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口

非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-NS5A;Vero-HCV-NS5A孟魯司特1,2-二醇(非對(duì)映)Montelukast 1,2-Diol(Mixture of Diastereomers)質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口