人膽管細胞型細胞培養(yǎng)冷凍保存細胞之方法：

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細胞凍存步驟：

資源名稱　人膽管細胞型細胞培養(yǎng)
種屬:HCCC-9810

形態(tài):上皮樣

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:RPMI1640(w/oHepes)10%FBS　

傳代方法:1：3~1：4傳代，2~3天1次

生長特性:貼壁生長

存儲條件:基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
細胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復(fù)蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大，一旦細胞狀態(tài)不好，很難說是細胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對細胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細胞儲存的zui好方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運輸也對細胞影響也不大，只需加25元運費(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。
細胞培養(yǎng)過程：

細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?/span>10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。
以下是人膽管細胞型細胞培養(yǎng)的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
人導(dǎo)管癌細胞;HCC38腺苷 3'-1酸 5'-1酰硫酸鋰鹽水合物Adenosine 3'-phosphate 5'-phosphosulfate lithium salt hydrate質(zhì)量規(guī)格：美國進口

XCL1 Others Human 人 XCL1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) rac (cis/trans)多奈哌齊N-氧化物rac (cis/trans) Donepezil N-Oxide質(zhì)量規(guī)格：美國進口

CM-R054大鼠子宮成纖維細胞完全培養(yǎng)基100mL6-O-去甲多奈哌齊6-O-Desmethyl Donepezil質(zhì)量規(guī)格：美國進口

BPH-1, 人細胞 B細胞,XJH細胞 PLC/PRF/5(人細胞)脫氫多奈哌齊（多奈哌齊雜質(zhì)）Dehydro Donepezil (Donepezil Impurity)質(zhì)量規(guī)格：美國進口

倉鼠/小鼠雜交瘤細胞;145-2C11多佐胺中間體Dorzolamide intermediate質(zhì)量規(guī)格：美國進口
人角質(zhì)細胞HHFKAmberlite® IRC-748螯合型離子交換樹脂質(zhì)量規(guī)格：Amberlite® IRC-748

非洲綠猴腎細胞系/HCV-E1;Vero-HCV-E1 人，A549細胞 QG-56(肺扁平上皮癌細胞)Amberlyst15離子交換樹脂(濕)質(zhì)量規(guī)格：濕Amberlyst 15 ion-exchange resin

人惡性多發(fā)性;ERA-2丁胺卡那霉素?zé)o水質(zhì)量規(guī)格：效價：>900 u/mgAmikacin

GFRA1 Others Human 人 GFRA1 / GFRα1 / GDNFRA 人細胞裂解液 (陽性對照) 氨茶堿(>質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRAminophyllin hydrate

CM-H077人心室肌細胞完全培養(yǎng)基100mL檸檬酸鉍銨質(zhì)量規(guī)格：BRAmmonium bismuth , hydrate
山羊皮膚細胞;WGS1尼可地爾-d4質(zhì)量規(guī)格：美國進口Nicorandil-d4

Ca Ski, 人細胞尼可地爾N-氧化物質(zhì)量規(guī)格：美國進口Nicorandil N-Oxide

人神經(jīng)膠質(zhì)細胞瘤細胞;U251 大鼠成纖維細胞完全培養(yǎng)基 100mL6-羥基尼可地爾質(zhì)量規(guī)格：美國進口6-Hydroxy Nicorandil

人組織細胞瘤細胞;U937 [U-937]25-脫乙?；Ｆ劫|(zhì)量規(guī)格：美國進口25-Desacetyl Rifampicin

WFDC2 Others Canine 狗 WAP5 / WFDC2 / HE4 人細胞裂解液 (陽性對照) L-腺苷質(zhì)量規(guī)格：美國進口L-Adenosine
人膽管細胞型細胞培養(yǎng)心肌成纖維細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)腺苷3‘，5’-環(huán)單1酸鈉一水合物Adenosine 3′,5′-cyclic monophosphate  salt monohydrate 質(zhì)量規(guī)格：美國進口

SERPINA1A Others Mouse 小鼠 Alpha 1 Aiypsin / SerpinA1a 人細胞裂解液 (陽性對照) 腺苷 5‘-（α,β-亞甲基）二1酸鹽，鈉鹽Adenosine 5'-(α,β-methylene)diphosphate,  salt質(zhì)量規(guī)格：美國進口

大鼠癌細胞;SHZ-88 5'-O-(4,4'-二甲氧基三苯甲基)-N6-苯甲?；佘?/span> N6-Benzoyl-5'-O-DMT-adenosine質(zhì)量規(guī)格：美國進口

中國倉鼠卵巢細胞(亞系*);CHO-HCV-E2 子宮鱗癌細胞(高分化)，HCC 94[HCC941122]細胞 S-180-S2D9細胞，鼠細胞8-疊氮腺苷8-Azido Adenosine  質(zhì)量規(guī)格：美國進口

人胚腎二倍體細胞;CCC-HEK-12-肼基腺苷2-Hydrazino Adenosine 質(zhì)量規(guī)格：美國進口
收到人膽管細胞型細胞培養(yǎng)處理方法
1、首先，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。