細(xì)胞培養(yǎng)過程：

冷凍保存細(xì)胞之方法：
豬腎細(xì)胞 冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

資源名稱　豬腎細(xì)胞
種屬:LLC-PK1

提供形式:T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶/凍存管

模式菌株:未知

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:90%高糖DMEM+10%FBS

生長(zhǎng)條件:95%空氣+5%二氧化碳37攝氏度

生長(zhǎng)特性:貼壁生長(zhǎng)

存儲(chǔ)條件:50%高糖DMEM+40%FBS+10%DMSO 液氮

細(xì)胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對(duì)于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對(duì)細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲(chǔ)存的zui好方式，快遞時(shí)間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對(duì)細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞凍存步驟：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號(hào)16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

收到豬腎細(xì)胞 處理方法
1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請(qǐng)拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長(zhǎng)密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。
以下是豬腎細(xì)胞 的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
HUVEC, 人臍內(nèi)皮細(xì)胞DAPT (GSI-IX)DAPT (GSI-IX)質(zhì)量規(guī)格：>98%,γ-secretase抑制劑

MN-s, 小鼠紋狀體神經(jīng)元 MSU-1細(xì)胞 Ha Fe(羊膜細(xì)胞)XAV-939;NVP-XAV 939XAV939質(zhì)量規(guī)格：>98%

急性T細(xì)胞細(xì)胞;TALL-104胡黃連苷I（標(biāo)準(zhǔn)品）Picroside I質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

F3 Others Mouse 小鼠 F3 / Tissue factor / CD142 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 胡黃連苷 II(標(biāo)準(zhǔn)品)Picroside II質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

人低侵襲性脈絡(luò)膜色素素瘤細(xì)胞;OCM-1A胡黃連苷 III（標(biāo)準(zhǔn)品）Picroside III質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品
人慢性髓系細(xì)胞;K562 大鼠肺大平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL5-鳥苷一1酸二鈉鹽(GMP)質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRGMP

原代細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑Many types of cells包裝：5/2.5/1ml腺苷-5單1酸(進(jìn)口原裝) 質(zhì)量規(guī)格：>99,ALFA原裝AMP

SERPINE1 Others Rat 大鼠 SerpinE1 / PAI-1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 腺苷-5單1酸(AMP) 質(zhì)量規(guī)格：>98,BRAdenosine-5-monophosphoric acid

中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞;CHO5'-溴尿嘧啶 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR5-Bromouracil

中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞;CTLA4 Ig-24 涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞，Acc-2細(xì)胞 104C1細(xì)胞，轉(zhuǎn)化的豚鼠胎體細(xì)胞擬人參皂苷F11(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Pseudoginsenoside F11
FAP Others Human 人 FAP / Seprase 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) EC肉湯100克

HEPG2.2.15 細(xì)胞HBV病毒株α-酮基纈酸鈣鹽 Calcium alpha-ketovaline,≥97.0% 51828-94-5 1G 通用試劑

CL-0290MDA-MB-468(人癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2異環(huán)鱗酰安 IfosfcMidq 3778-73-

RLF, 大鼠成纖維細(xì)胞胺藍(lán)O1克2～8°C

雙位點(diǎn)HC-kit受體細(xì)胞株;DMF7 人子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL(腦心浸液瓊脂)
豬腎細(xì)胞 CL-0270CRT(人神經(jīng)細(xì)胞)5×106cells/瓶×2溴莫尼定 Brimonidine質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

KB-C1.5細(xì)胞，細(xì)胞 人T瘤轉(zhuǎn)基因細(xì)胞,Jurkat D,E細(xì)胞 人上皮細(xì)胞;Hep-2磺草靈Asulam質(zhì)量規(guī)格：>95%

769-P(人腎細(xì)胞腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2磺草靈(標(biāo)準(zhǔn)品)Asulam質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

ACVRL1 Others Rat 大鼠 ALK-1 / ACVRL1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 苯磺酸貝托司汀Bepotastine besilate質(zhì)量規(guī)格：>98.5%

星形細(xì)胞生長(zhǎng)添加物SteCGS葉綠素銅鈉鹽 copper chlorophyllin質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR